[发明专利]胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法

说明书

本发明提供了一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，涉及病理鉴别技术领域，本发明通过Masson染色结合多光子成像分析对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原进行组织评价，本发明将两种胶原分析方式结合在一起，能快速、简便、精确的对胃浆膜表面胶原进行分析，有助于临床工作者了解患者胃癌浆膜表面胶原情况，在评估胃癌患者的肿瘤恶性程度、转移及复发的可能性大小方面具有重要参考价值。本发明设计合理，技术成熟，简便易行，具有广阔的临床应用前景和良好的科研推广价值。

技术领域

本发明涉及病理鉴别技术领域，尤其是涉及一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法。

背景技术

我国最新的癌症统计数据显示，胃癌是我国发病率第二、肿瘤致死率第二的恶性肿瘤，是威胁我国居民健康的主要癌症之一。在胃癌进展过程中，肿瘤细胞从粘膜层向粘膜下层、肌层逐层突破，最终浸润浆膜层，脱落到腹腔形成种植转移。浆膜层是肿瘤细胞进入腹腔的最后一道屏障，因此了解胃浆膜面在胃癌中的改变对于研究胃癌腹腔种植转移具有重要意义。

细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)是肿瘤微环境中的主要成分，在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。一方面，肿瘤细胞分泌大量细胞因子作用于EMC，使其成分及构象改变，为肿瘤细胞的逃逸创造条件。另一方面，ECM在肿瘤的整个发生发展过程中，随肿瘤病程的进展产生相应的改变，并通过刺激产生生物化学信号和生物物理信号，影响细胞的黏着和迁移，二者相互作用，共同影响肿瘤的浸润、转移进程。

胶原作为ECM中的主要成分，也是ECM功能的主要发挥者。在乳腺癌胶原的研究中发现，胶原纤维直接参与了肿瘤细胞的迁移过程、胶原密度增加可以直接促进乳腺上皮细胞的增殖和分化，并显著增加了乳腺癌肺部转移的风险；在胃癌胶原的研究中发现，肿瘤浸润的胃浆膜表面胶原与正常胃浆膜表面胶原具有显著差异，胃浆膜表面胶原的变化与胃癌的预后密切相关。

由此可知，胶原是研究胃癌的发生发展以及帮助临床判断胃癌预后的重要指标，观察、分析胶原的宏观及微观结构无论对于科研还是临床都具有重要意义。而目前尚无针对胃浆膜表面胶原进行直观评价的方法，一般使用的胶原分析方法——胶原蛋白(羟脯氨酸)含量分析，操作繁锁耗时且精确程度有限，既不便于分析又不足以提供充分的胶原信息。

因此，研究开发出一种对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，进而直观、准确、丰富的获取胃浆膜表面胶原信息，帮助临床工作者了解胃浆膜表面胶原变化，其结果在评估胃癌患者的肿瘤恶性程度、转移及复发的可能性大小等方面均具有十分重要的意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，上述方法通过Masson染色结合多光子成像分析对胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原进行组织评价，有助于临床工作者直观、准确、丰富的获取胃浆膜表面胶原信息，进而了解胃浆膜表面胶原变化的情况。

本发明提供的一种胃癌切除标本的胃浆膜表面胶原组织评价方法，所述方法包括以下步骤：

(a)样本制备：从胃癌切除标本上分离胃浆膜组织后制备胃浆膜表面组织蜡块，随后，沿蜡块的胃浆膜表面水平切取组织切片，制得待测多光子成像切片；

(b)多光子胶原成像：对步骤(a)待测多光子成像切片进行二次谐波成像，得到多光子胶原成像图；

(c)切片染色：将步骤(b)多光子胶原成像后的切片进行Masson染色，然后用切片扫描仪对Masson染色切片进行扫描，获得Masson染色图像；

(d)成像分析：将步骤(b)得到的多光子成像图和步骤(c)得到的Masson染色图进行对比，并标记出多光子图像中的胶原部位，随后对多光子成像图的胶原部位进行直观图像分析和/或导入图像分析系统，进行胶原层面分析。