[发明专利]一种胰岛素样生长因子结合蛋白-3的定量检测试剂盒及其非诊断目的的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种胰岛素样生长因子结合蛋白-3 的定量检测试剂盒及其非诊断目的的检测方法。

背景技术

矮小症是指儿童的身高低于同性别、同年龄、同种族儿童平均身高的2个标准差，每年生长速度低于5厘米者。矮小症是发育期儿童非常严重的一种疾病，与遗传、环境、内分泌等多种因素有关，其中内分泌系统是导致矮小症的重要因素。生长激素(Growth Hormone,GH)、胰岛素样生长因子 -1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3 (IGF-binding proteins-3,IGFBP-3)共同组成了GH-IGF-1轴，其在小儿的生长发育过程中发挥重要调控作用。IGF-1是由GH刺激后分泌的，GH通过IGF-1 发挥促进人体各组织的生长功能。而IGFBP-3是IGF-1在血循环中的主要载体，可延长IGF-1在血循环中的半衰期，与GH的关系也最为密切。由于IGF-1和 IGFBP-3的分泌可以直接反应体内GH的水平，而且无昼夜节律的变化，因此研究报道认为，IGFBP-3和IGF-1可以作为矮小症和生长激素缺乏症(growth hormone deficienty,GHD)的诊断指标。

目前已有相关的IGFBP-3的检测试剂盒上市，该试剂盒包括96孔板、标准品、检测溶液A、检测溶液B、TMB底物和浓洗涤液，实验流程包括：

1.实验前标准品、试剂及样本的准备；

2.加样(标准品及样本)100μL，37℃孵育1小时；

3.吸弃，加检测溶液A 100μL，37℃孵育1小时；

4.洗板3次；

5.加检测溶液B 100μL，37℃孵育30分钟；

6.洗板5次；

7.加TMB底物90μL，37℃孵育10-20分钟；

8.加终止液50μL，立即450nm读数。

但采用该试剂盒检测IGFBP-3的浓度时存在灵敏度较差的问题。因此如何完全分离和纯化IGFBP-3，从而提高IGFBP-3定量检测试剂盒的灵敏度，是目前急需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种胰岛素样生长因子结合蛋白-3的定量检测试剂盒及其非诊断目的的检测方法。该IGFBP-3定量检测试剂盒灵敏度高、特异性强、稳定性好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种胰岛素样生长因子结合蛋白-3的定量检测试剂盒，该定量检测试剂盒包括：IGFBP-3单克隆抗体，IGFBP-3重组抗原标准品，生物素化的IGFBP-3多克隆抗体，酶标记的链霉亲和素，显色底物，终止液。

作为优选，IGFBP-3单克隆抗体的浓度为0.1～10μg/mL。

优选地，IGFBP-3单克隆抗体的浓度为0.5～4.0μg/mL。

更优选地，IGFBP-3单克隆抗体的浓度为1.0μg/mL。

作为优选，IGFBP-3重组抗原标准品的浓度为50～100ng/mL。

优选地，IGFBP-3重组抗原标准品的浓度为50～60ng/mL。

更优选地，IGFBP-3重组抗原标准品的浓度为50ng/mL。

作为优选，生物素化的IGFBP-3多克隆抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL。

优选地，生物素化的IGFBP-3多克隆抗体的浓度为0.25～1.0μg/mL。

更优选地，生物素化的IGFBP-3多克隆抗体的浓度为0.25μg/mL。

作为优选，生物素化的IGFBP-3多克隆抗体为兔源生物素化的IGFBP-3 多克隆抗体。

作为优选，酶标记的链霉亲和素为HRP(辣根过氧化物酶)标记的链霉亲和素。

作为优选，显色底物为四甲基联苯胺。

本发明还提供了一种非诊断目的的检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3浓度的方法，包括如下步骤：

步骤1：将IGFBP-3单克隆抗体包被于固相载体表面，封闭；

步骤2：将IGFBP-3重组抗原标准品或样品中的一种、生物素化的IGFBP-3 多克隆抗体与IGFBP-3单克隆抗体共同孵育；

步骤3：加入酶标记的链霉亲和素进行孵育；

步骤4：加入显色底物进行显色，终止显色后在450nm的波长下检测OD 值；