[发明专利]一种石杉碱乙衍生物及其制备方法

权利要求书

1.一种石杉碱乙衍生物的制备方法，所述石杉碱乙衍生物的结构如所示，其特征在于，利用蛇足石杉内生真菌BjerkanderaadustaZJUT-HS8对石杉碱乙进行生物转化获得，具体方法是将蛇足石杉内生真菌BjerkanderaadustaZJUT-HS8接种至发酵培养基，同时加入石杉碱乙，在25-28℃、180rpm条件下发酵培养，取发酵液进行分离纯化，获得所述石杉碱乙衍生物；所述发酵培养基终浓度组成为碳源5-30g/L、氮源10-25g/L、无机盐1-5g/L，溶剂为水，pH值自然；所述碳源为葡萄糖；所述氮源为马铃薯浸出粉；所述无机盐为磷酸二氢钾；加入发酵培养基的石杉碱乙事先溶解于无水乙醇，浓度10mg/mL，并在无菌条件下经0.22μm微孔滤膜过滤，其在发酵液中的终浓度为0.03-0.2mg/mL；所述发酵液分离纯化方法为：(1)将发酵液过滤除去菌丝，用氨水调节发酵液pH至9-11，用氯仿萃取3次，合并有机层，减压浓缩至无液体流出，得氯仿萃取物；(2)将步骤(1)氯仿萃取物经硅胶柱层析分离，依次用体积比40∶1、20∶1、15∶1、8∶1、6∶1的氯仿-甲醇溶液洗脱，每个洗脱液洗脱2个柱体积，收集体积比8∶1的氯仿-甲醇溶液的流出液；(3)将步骤(2)收集的流出液浓缩至干，用ODSC18柱层析进行纯化，用体积比3∶1的甲醇-水溶液洗脱，薄层层析检测各个流出液，合并含目标组分的流出液，减压浓缩即得石杉碱乙衍生物。

2.如权利要求1所述石杉碱乙衍生物的制备方法，其特征在于，蛇足石杉内生真菌BjerkanderaadustaZJUT-HS8发酵液制备方法为：(1)将蛇足石杉内生真菌BjerkanderaadustaZJUT-HS8接种至斜面培养基，在25-28℃培养5-7天，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：葡萄糖10-30g/L，马铃薯浸出粉5-25g/L，KH₂PO₄0.5-2g/L，琼脂10-20g/L，溶剂为水，pH值自然；(2)将斜面菌体接种至种子培养基，在25-28℃、180rpm、体积装液量30％条件下培养7天，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成为：葡萄糖10-50g/L，马铃薯浸出粉5-25g/L，KH₂PO₄0.5-2g/L，溶剂为水，pH值自然；(3)将种子液以体积浓度5-10％的接种量接种至发酵培养基，同时在发酵培养基中加入石杉碱乙，在25-28℃、180rpm、体积装液量30％条件下培养14天。