[发明专利]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒。

背景技术

急性肾损伤(Acutekidneyinjury，AKI)是由多种原因引起的，可发生在各种临床情况下的一种复杂的肾功能减退综合征。它可以表现为血肌酐水平的轻微升高，也可以表现为急性肾衰竭。研究发现，AKI的发生与病死率的增加密切相关。这就要求医师在临床工作中能早期诊断，最好在肾小球滤过率开始下降，或者仅有组织损伤而肾小球滤过率尚正常的阶段及时发现并干预，以改善预后、降低病死率。血肌酐和尿量是目前AKI的诊断指标，但受到很多因素影响，敏感性和特异性都不高。因AKI诊断滞后，常贻误治疗的最佳时期。寻求具有高敏感性、特异性、易检测的新的生物标志物已经成为当前研究热点之一。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinase-associatedlipoealin，NGAL)是迄今研究最多的AKI早期标志物之一。它最初在人类中性粒细胞中被发现，共价结合于源自中性粒细胞的明胶酶，是脂质运载蛋白超家族成员之一。正常情况下，NGAL只在肾脏、肝脏、胃和结肠等组织中以极低水平表达。当炎症发生或上皮细胞受到损伤性刺激时，NGAL才被诱导而发生高表达。早期动物实验发现，NGAL是通过微阵列基因表达谱分析检测到的最早、最稳定出现的蛋白质之一。并且，在AKI发生不在一项前瞻性研究中，对635例分别患有AKI、肾前性氮质血症、慢性肾疾病者或肾功能正常者测量NGAL及其他多种标志物。NGAL诊断AKI的敏感度为90％、特异度为99.5％，均优于其他标志物。另外，它在肾毒性(如使用顺铂、抑肽酶,冠状动脉造影术后)、肾血管病(如溶血尿毒综合征)及自身免疫病(如狼疮性肾炎)等所致的AKI中亦具早期诊断价值。目前认为，NGAL不仅是诊断AKI敏感的标志物，还有助于AKI与肾前性氮质血症、慢性肾疾病和正常肾功能的鉴别。AKI的发生与否，对脓毒症患者病情转归至关重要。研究发现，血NGAL水平在伴或不伴有AKI的全身炎性反应综合征、严重脓毒症及脓毒症休克患者都有升高，可能因为它是由活化的中性粒细胞所释放的，所以多种其他疾病及其并发症也可能使重症患者的NGAL测值升高，故特异性不高，而尿NGAL更有利于诊断，因为在脓毒症患者中，未发生AKI的患者其尿NGAL水平并不高。NGAL也是对AKI患者疾病严重程度和预后的评价指标。对需要接受肾替代治疗的AKI患者的研究发现，NGAL可作为其28d病死率的独立预测指标。以上研究表明，NGAL可作为AKI早期诊断的生物标志物。

中国专利CN104880562A)公开了用于检测肾小管细胞损伤和早发的方法和试剂盒，该试剂盒包括与尿样接触的介质，介质上附加有对作为肾小管细胞损伤生物标志物的NGAL特异且能够与NGAL复合的捕获抗体。检测方法为：尿样与NGAL捕获抗体结合，形成抗体-NGAL复合物，抗体-NGAL复合物与第二抗体结合，形成第二抗体复合物，检测第二抗体复合物中的第二抗体，第二抗体的量与尿样中NGAL的量成正比关系。该方法检测NGAL的检测时长需要数个小时，无法满足目前临床上需要快速得到患者NGAL含量的要求。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是现有技术中检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测时长太长。进而提供一种检测快速且灵敏度高的检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包括

第一储液组件，用于储存NGAL校准品；

第二储液组件，用于储存酶结合物工作液；

第三储液组件，用于储存磁珠工作液；

第四储液组件，用于储存清洗液；

第五储液组件，用于储存底物溶液；

第六储液组件，用于储存前处理试剂；

第七储液组件，用于存储NGAL质控品。

可选的，所述磁珠工作液包括标记有NGAL抗体的羧基磁珠；所述磁珠的粒径为1-5μm。

可选的，所述标记有NGAL抗体的羧基磁珠的浓度为0.1-1mg/ml。

可选的，所述酶结合物工作液包括碱性磷酸酶标记的抗NGAL抗体。

可选的，所述碱性磷酸酶标记的抗NGAL抗体的浓度为0.5～2μg/ml。

可选的，所述NGAL校准品和所述NGAL质控品是含有NGAL抗原的Tris缓冲液。

可选的，所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。