[发明专利]肾损伤因子1检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种肾损伤因子1检测试剂盒。

背景技术

急性肾损伤(Acutekidneyinjury，AKI)是由多种原因引起的，可发生在各种临床情况下的一种复杂的肾功能减退综合征。它可以表现为血肌酐水平的轻微升高，也可以表现为急性肾衰竭。研究发现，AKI的发生与病死率的增加密切相关。这就要求医师在临床工作中能早期诊断，最好在肾小球滤过率开始下降，或者仅有组织损伤而肾小球滤过率尚正常的阶段及时发现并干预，以改善预后、降低病死率。血肌酐和尿量是目前AKI的诊断指标，但受到很多因素影响，敏感性和特异性都不高。因AKI诊断滞后，常贻误治疗的最佳时期。寻求具有高敏感性、特异性、易检测的新的生物标志物已经成为当前研究热点之一。

肾损伤因子1(Kidneyinjurymolecμle-1，KIM-1)是一种黏附分子，可能是一种新的免疫球蛋白超家族的一员。采用基因芯片技术研究发现，KIM-1基因是大鼠缺血/再灌注模型肾脏中表达最显著的基因。近年的动物实验表明，KIM-1可能较其他标志物更为敏感。生理情况下，KIM-1仅在肝、肾、脾中有微弱表达,而在AKI时其表达显著增强。人类及啮齿类动物的近端肾小管损伤后，位于胞外的KIM-1蛋白脱落进入尿液。越来越多的研究已经在各种缺血、肾毒性和肾移植等所致AKI的动物模型中证实KIM-1可以作为早期、无创和特异的AKI诊断标志物。KIM-1作为新的候选AKI早期诊断标志物，有其优势：①敏感性高，其在正常组织不表达，AKI发生时，其在近端小管上皮细胞的表达才显著上调，并一直持续到细胞完全康复；②特异性很高，特别是对缺血性或肾毒性AKI特异性更高，在其他器官(在近年文献中仅发现有卵巢透明细胞癌时KIM-1升高的报道)很少表达；③其胞外部分脱落进入尿液后性质比较稳定，容易检测；④极少受到慢性肾脏疾病和尿路感染的影响。

中国专利CN104730250A公开了一种人肾损伤分子的酶联免疫试剂盒，包括识别人肾损伤分子不同表位的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体，以重组表达的人肾损伤分子作为抗原标准品。检测方法为：尿液样本先离心处理，取上清液，捕获抗体与上清液结合，形成捕获抗体-KIM1复合物，在加入检测抗体，与上述复合结合形成检测抗体-捕获抗体-KIM1复合物，加入显色液进行显色，通过酶标仪在450nm波长下检测发光值，计算样品中KIM-1的含量。该试剂盒检测时长至少三小时，检测时长太长，无法满足目前临床需求。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是现有技术中检测肾损伤因子1检测时长太长的缺陷。进而提供一种检测快速且灵敏度高的检测肾损伤因子1的检测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种肾损伤因子1检测试剂盒，包括

第一储液组件，用于储存KIM-1校准品；

第二储液组件，用于储存酶结合物工作液；

第三储液组件，用于储存磁珠工作液；

第四储液组件，用于储存清洗液；

第五储液组件，用于储存底物溶液；

第六储液组件，用于储存前处理试剂；

第七储液组件，用于存储KIM-1质控品。

可选的，所述磁珠工作液包括标记有KIM-1抗体的羧基磁珠；所述磁珠的粒径为1-5μm。

可选的，所述标记有KIM-1抗体的羧基磁珠的浓度为0.1～1mg/ml。

可选的，所述酶结合物工作液包括碱性磷酸酶标记的抗KIM-1抗体。

可选的，所述碱性磷酸酶标记的抗KIM-1抗体的浓度为0.5～2μg/ml。

可选的，所述KIM-1校准品和所述KIM-1质控品是含有KIM-1抗原的HEPES溶液。

可选的，所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

可选的，所述前处理试剂是包括NaCl、蔗糖、甘油、吐温20以及防腐剂的缓冲液。

本发明还提供一种检测肾损伤因子1的方法，使用所述的肾损伤因子1检测试剂盒检测，包括如下步骤：

(1)将待测样本、KIM-1校准品以及KIM-1质控品分别加入到前处理试剂中，混匀后加入磁珠工作液、酶结合物工作液，混匀后37℃-42℃反应5min-10min，得到第一反应液；

(2)将所述第一反应液进行磁分离，收集磁珠；通过清洗液清洗所述磁珠；

(3)在清洗后的所述磁珠中加入底物溶液，得到混合液；检测所述混合液的发光强度。