[发明专利]生产L-丝氨酸的重组菌及其构建方法

权利要求书

1.一种生产L-丝氨酸的重组菌，其特征在于，所述重组菌与出发菌相比具有提高的甘氨酸裂解系统GCV的表达，具有由P_hom启动子调控的降低的丝氨酸羟甲基转移酶GlyA和顺乌头酸酶Acn的表达，具有敲除的丙酮酸羧化酶Pyc，所述P_hom启动子的核苷酸序列如SEQ IDNO.2自5’末端第928-1057位核苷酸所示，出发菌为谷氨酸棒杆菌ATCC13032；

所述具有提高的甘氨酸裂解系统GCV的表达为所述重组菌具有一个或多个编码甘氨酸裂解系统的gcv基因的拷贝和所述gcv基因的表达以高转录或高表达活性的调控元件介导，所述gcv基因为编码氨甲基转移酶的gcvT基因、编码载体蛋白的gcvH基因和编码甘氨酸脱氢酶的gcvP基因，所述gcvT基因和gcvH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述gcvP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌与出发菌相比具有降低的丝氨酸O-乙酰转移酶CysE的表达。

3.根据权利要求2所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌中编码丝氨酸O-乙酰转移酶cysE基因失活和/或cysE基因的表达以低转录或低表达活性的调控元件介导。

4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述失活为敲除所述重组菌中的cysE基因，所述低转录或低表达活性的调控元件为P_hom启动子，P_hom启动子的核苷酸序列如SEQ IDNO.2自5’末端第928-1057位核苷酸所示。

5.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，

所述高转录或高表达活性的调控元件为P₄₅启动子，P₄₅启动子的核苷酸序列如SEQ IDNO.5自5’末端第1005-1182位核苷酸。

6.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌与出发菌相比具有降低的顺乌头酸酶Acn和丝氨酸羟甲基转移酶GlyA的表达，敲除的丙酮酸羧化酶Pyc、丝氨酸脱水酶SdaA和转录因子glyR基因。

7.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌与出发菌相比具有提高的3-磷酸甘油酸脱氢酶SerA^r、磷酸丝氨酸转氨酶SerC、磷酸丝氨酸磷酸酶SerB和/或苏氨酸外排转运蛋白ThrE的表达，其中SerA^r为被解除丝氨酸反馈抑制的SerA。

8.根据权利要求7所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌中具有一个或多个编码SerA^r的serA^r基因、编码SerC的serC基因、编码SerB的serB基因和/或编码ThrE的thrE基因的拷贝，和/或serA^r基因、serC基因、serB基因和/或thrE基因的表达以高转录或高表达活性的调控元件介导，所述serA^r基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述serC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述serB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述thrE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.16自5’末端第332-1801位核苷酸所示。

9.根据权利要求8所述的重组菌，其特征在于，所述高转录或高表达活性的调控元件为P_eftu启动子和/或P_sod启动子，所述P_eftu启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.23自5’末端第629-828位核苷酸所示，所述P_sod启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.26自5’末端第635-826位核苷酸所示。