[发明专利]一种马铃薯病毒检测试剂盒

权利要求书

1.一种马铃薯病毒检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括试剂和一个反应管；其中试剂为：M-MLV、RT-PCR buffer、DNA聚合酶、dNTP、六种病毒的上游引物、六种病毒的下游引物、牛血清白蛋白、Tween 20和甘油；

所述M-MLV、RT-PCR buffer、DNA聚合酶、dNTP、六种病毒的上游引物、六种病毒的下游引物、牛血清白蛋白、Tween 20和甘油的体积比是1:12.5:2:2.5:10:10:2:1:1；

所述试剂的加入顺序为：向反应管中加入RT-PCR buffer，均匀涂布于反应管底部，冻干4h，然后向冻干后的反应管中加入六种病毒的上下游引物和dNTP，冻干2h，再将M-MLV和DNA聚合酶、牛血清白蛋白、Tween20和甘油在4℃的条件下充分混合，然后均匀涂布于反应管底部，再冻干1h；

所述六种病毒分别为马铃薯Y病毒、马铃薯M病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒、马铃薯X病毒和马铃薯卷叶病毒；

所述六种病毒的上下游引物分别为：

马铃薯S病毒上游引物PVS-F：GAGGCTATGCTGGAGCAGAG；

马铃薯S病毒下游引物PVS-R：AATCTCAGCGCCAAGCATCC；

马铃薯X病毒上游引物PVX-F：ATGTCAGCACCAGCTAGCA；

马铃薯X病毒下游引物PVX-R：TGGTGGTGGTAGAGTGACAA；

马铃薯M病毒上游引物PVM-F：ACATCTGAGGACATGATGCGC；

马铃薯M病毒下游引物PVM-R：TGAGCTCGGGACCATTCATAC；

马铃薯Y病毒上游引物PVY-F：GGCATACGGACATAGGAGAAACT；

马铃薯Y病毒下游引物PVY-R：CTCTTTGTGTTCTCCTCTTGTGT；

马铃薯A病毒上游引物PVA-F：GATGTCGATTTAGGTACTGCTG；

马铃薯A病毒下游引物PVA-R：TCCATTCTCAATGCACCATAC；

马铃薯卷叶病毒上游引物PLRV-F：CGCGCTAACAGAGTTCAGCC；

马铃薯卷叶病毒下游引物PLRV-R：GCAATGGGGGTCCAACTCAT。

2.根据权利要求1所述的一种马铃薯病毒检测试剂盒，其特征在于M-MLV的浓度为100U/μL。

3.根据权利要求1所述的一种马铃薯病毒检测试剂盒，其特征在于dNTP为10mM eachdNTP。

4.根据权利要求1所述的一种马铃薯病毒检测试剂盒，其特征在于牛血清白蛋白的浓度为100μg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种马铃薯病毒检测试剂盒，其特征在于每升RT-PCR buffer由500mM KCl、100mM Tris-HCl和15mM MgCl₂组成。

6.根据权利要求5所述的一种马铃薯病毒检测试剂盒，其特征在于Tris-HCl的pH为8.3。