[发明专利]肝脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种肝脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒。

背景技术

急性肾损伤(Acutekidneyinjury，AKI)是由多种原因引起的，可发生在各种临床情况下的一种复杂的肾功能减退综合征。它可以表现为血肌酐水平的轻微升高，也可以表现为急性肾衰竭。研究发现，AKI的发生与病死率的增加密切相关。这就要求医师在临床工作中能早期诊断，最好在肾小球滤过率开始下降，或者仅有组织损伤而肾小球滤过率尚正常的阶段及时发现并干预，以改善预后、降低病死率。血肌酐和尿量是目前AKI的诊断指标，但受到很多因素影响，敏感性和特异性都不高。因AKI诊断滞后，常贻误治疗的最佳时期。寻求具有高敏感性、特异性、易检测的新的生物标志物已经成为当前研究热点之一。

肝脏型脂肪酸结合蛋白(Liver-typefattyacidbindingprotein，L-FABP)是一组低分子量(14～15kD左右)的可以结合长链脂肪酸的高保守性胞质蛋白，是一种表达在人类肾脏近端小管细胞内的小分子蛋白质，它作为参与游离脂肪酸(FFAs)在肾小管内代谢的关键蛋白，在AKI时除了具有肾保护作用外，还能作为反映肾损伤的早期标志物。人类肾脏中有两种类型的脂肪酸结合蛋白(fattyacidbindingprotein，FABP)，肝脏型(L-FABP，表达于近端肾小管)和心脏型(H-FABP，表达于远端肾小管)。在近端肾小管游离脂肪酸与上皮细胞胞质FABPs结合，进而转运到线粒体或过氧物酶体进行β-氧化代谢。在慢性肾脏病、糖尿病肾病、IgA肾病及造影剂肾病等多种病理情况下都发现尿L-FABP增高。在蛋白负荷肾病和单侧输尿管梗阻动物模型也观察到L-FABP表达增高，尿L-FABP排出增加，且转基因小鼠实验提示L-FABP可能对肾小管有保护作用。新近报道40例心肺分流术儿童术采用ELISA法测定尿L-FABP，在发生AKI者(Scr较基础值增加50％)术后4h、12h分别增高94倍和45倍，较Scr改变提早l～3d，以尿L-FABP增加24倍为切点，其预测AKI的敏感性为71.4％。特异性68.4％，显示尿L-FABP是预测心脏手术后AKI的敏感、特异、早期和独立的生物学标志物。

中国专利CN104880562A公开了一种L-FABP快速检测试剂及其制备方法，包括基片和覆盖在基片上的盖片，基片上依次加工有加样区、反应区、检测区和废液区；加样区、反应区、检测区和废液区均有微流通道构成；加样区上放置有用于过滤生物样品的聚酯膜，反应区包括检测线和控制线，检测线包被有干燥的荧光微球标记L-FABP多克隆抗体，控制线包被有荧光微球标记羊抗鼠IgG抗体。加样后，样品中的L-FABP与检测线上结合有荧光微球标记抗体的L-FABP结合，形成检测线的荧光信号，检测线的荧光信号与样品中L-FABP的含量成正比关系。利用该方法检测L-FABP灵敏度不高。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是现有技术中检测肝脏型脂肪酸结合蛋白灵敏度不高的缺陷。进而提供一种检测快速且灵敏度高的检测肝脏型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种肝脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，包括

第一储液组件，用于储存L-FABP校准品；

第二储液组件，用于储存酶结合物工作液；

第三储液组件，用于储存磁珠工作液；

第四储液组件，用于储存清洗液；

第五储液组件，用于储存底物溶液；

第六储液组件，用于储存前处理试剂；

第七储液组件，用于存储L-FABP质控品。

可选的，所述磁珠工作液包括标记有L-FABP抗体的羧基磁珠；所述磁珠的粒径为1-5μm。

可选的，所述标记有L-FABP抗体的羧基磁珠的浓度为0.1～1mg/ml。

可选的，所述酶结合物工作液包括碱性磷酸酶标记的抗L-FABP抗体。

可选的，所述碱性磷酸酶标记的抗L-FABP抗体的浓度为0.5～2μg/ml。

可选的，所述L-FABP校准品和所述L-FABP质控品是含有L-FABP抗原的Tris缓冲液。

可选的，所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

可选的，所述前处理试剂是包括NaCl、蔗糖、甘油、吐温20以及防腐剂的缓冲液。

本发明提供一种检测肝脏型脂肪酸结合蛋白的方法，使用所述的肝脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒检测，包括如下步骤：