[发明专利]一种检测叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的方法

权利要求书

1.一种检测叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

a、SiO₂-FO包被抗原和免疫原的制备；

b、抗SiO₂-FO多克隆抗体的制备；

c、BODIPY-PFNPs的制备；

d、BODIPY-PFNPs与抗SiO₂-FO抗体的交联；

e、以SiO₂-FO-OVA为包被抗原，以BODIPY-PFNPs标记的抗SiO₂-FO抗体作为一抗，建立直接竞争荧光免疫分析法定量检测SiO₂-FO；以SiO₂-FO标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线，从而定量检测出SiO₂-FO的浓度；

所述步骤c采用沉淀聚合法合成BODIPY-PFNPs，具体包括以下步骤：

c-1、将氟化硼二吡咯BODIPY荧光染料与丙烯酰胺AM溶于乙腈中，充分混匀；

c-2、加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯EDGMA，超声混匀；

c-3、再加入引发剂偶氮二异丁腈AIBN，磁力搅拌混匀；

c-4、通氮气，然后密封，置于油浴锅中，50～65℃条件下恒温聚合；

c-5、聚合完成后，离心分离，先用无水甲醇清洗2次，再用乙腈洗至上清液无荧光，冷冻干燥即得包裹BODIPY的新型聚合物纳米粒子(BODIPY-PFNPs)，4℃保存。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤c具体包括以下步骤：

c-1、将0.05～0.1mmol氟化硼二吡咯BODIPY荧光染料与0.5～1.0mmol丙烯酰胺AM溶于30～50mL乙腈中，充分混匀；

c-2、加入1.0～1.5mmol交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯EDGMA，超声混匀10～20min；

c-3、再加入3～10mg引发剂偶氮二异丁腈AIBN，磁力搅拌混匀；

c-4、通氮气8～15min，密封，置于油浴锅中，50～65℃条件下恒温聚合24h；

c-5、聚合完成后，离心分离，先用无水甲醇清洗2次，再用乙腈洗至上清液无荧光，冷冻干燥即得包裹BODIPY的新型聚合物纳米粒子(BODIPY-PFNPs)，4℃保存。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，其中BODIPY、AM、EDGMA三者之间的物质的量之比1:16:24。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤d采用碳二亚胺法将BODIPY-PFNPs与抗SiO₂-FO抗体进行交联，包括以下步骤：

d-1、将步骤c制备的BODIPY-PFNPs洗涤后，分散在PBS缓冲液中；

d-2、将EDAC和NHS溶于水中，混合后加入到步骤d-1制备的BODIPY-PFNPs溶液中，搅拌反应；

d-3、将反应液离心分离，洗涤沉淀，然后重新分散在PBS溶液中；

d-4、用PBS将抗SiO₂-FO多克隆抗体稀释，取该抗体溶液加入到步骤d-3制备的BODIPY-PFNPs溶液中，搅拌反应；

d-5、反应结束后，离心分离，洗涤沉淀，然后分散于PBS缓冲液中即为BODIPY-PFNPs标记的抗SiO₂-FO抗体，4℃保存。