[发明专利]一种与野生二粒小麦抗白粉病基因紧密连锁的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明分子遗传育种领域，具体涉及一种与野生二粒小麦抗白粉病基因紧密连锁的分子标记及其应用。

背景技术

野生二粒小麦(Triticum dicoccoides，2n=4x=28，AABB)是普通小麦(Triticum aestivum，2n=6x=42，AABBDD)的野生四倍体祖先，其核基因组由A组和B组组成，细胞质基因组来自于B组。普通小麦A、B基组的供体种是野生二粒小麦，因此其与普通小麦的A、B染色体组具有较高的同源性。野生二粒小麦的多样性中心大约起源于一万年前，位于近东新月沃地，广泛分布在目前的以色列、土耳其、伊朗、叙利亚等国境内。以色列野生二粒小麦对小麦的主要病害白粉病、条锈病、叶锈病等具有一定的抗性，并且在耐旱、耐盐、矿质养分利用率等方面表现优良，在种质资源研究和现代小麦品种的遗传改良中起到重要的作用。

小麦白粉病是由禾本科布氏白粉菌（Blumeria graminisf.sp.tritici）引起的气传真菌性病害，其生理小种多、变异快，在各主要麦区均有分布，严重威胁小麦的安全生产。“绿色革命”以来，随着小麦半矮秆品种的推广、氮肥施用量的增加以及全球气候变暖，造成麦田郁闭，湿度过大，白粉病害流行，逐渐成为我国麦区的主要病害之一。另一方面，白粉病病原菌生理小种复杂多变，导致品种抗性丧失频繁。目前我国小麦推广品种中仍然有效或在部分地区有效的抗白粉病基因主要是Pm2、Pm4a、Pm4b和Pm21等少数几个基因。因此，在育种实践中，加快利用一些抗性较好的抗白粉病新基因，如Pm12、Pm13、Pm16、Pm30、Pm36、Pm40、Pm41、Pm42、Pm43，积极发掘新的抗白粉病基因并应用于育种实践， 对于提高新育成小麦新品种的白粉病抗性，延长抗病品种使用时间，减缓抗病性“丧失”进程，提高抗性持久性有重要意义。

抗病基因的分子标记及连锁图谱建立是对目标基因进行精细遗传定位及图位克隆抗病基因的基础，同时更是分子标记辅助育种的有力工具。SSR标记是一类广泛存在于基因组上的、由几个核苷酸重复单位组成的串联重复序列。由于在基因组上数量丰富、多态性高、共显性遗传、操作简单、结果稳定可靠等优点而被广泛应用与种质鉴定、基因的分子标记定位及分子标记辅助育种中。

发明内容

本发明提供一种与野生二粒小麦抗白粉病基因紧密连锁的分子标记以及应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：所述分子标记与以色列引进野生二粒小麦ES4中抗白粉病基因紧密连锁，

所述分子标记是显性SSR标记sdau714，用于扩增所述的分子标记的引物如下：

sdau714-F：5’-tcatcggcacattgggtag-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

sdau714-R：5’-cagacactccttgacggttt-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

优选的，利用所述的分子标记引物sdau714进行PCR扩增，在抗病材料ES4中扩增出一条807bp的特异片段。

优选的，所述的分子标记sdau714，与野生二粒小麦ES4中抗白粉病基因的遗传距离为0.1cM。

优选的， 所述分子标记sdau714用于鉴定野生二粒小麦ES4中抗白粉病基因的步骤如下：

1）以野生二粒小麦ES基因组DNA为PCR模板，以SSR标记sdau714为引物，进行PCR扩增，反应体系为10μl，所述反应体系包括：80-120ng/μl野生二粒小麦基因组DNA，2×Taq MasterMix，无菌水定容至10μl；

2）PCR扩增程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸1min，以后每个循环依次降低1℃，直到53℃，共12个循环；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，26个循环；72℃延伸10min，10℃保存备用；

3）取PCR产物8μl，限制性内切酶HhaI1μl，10×NEBuffer1.5μl，无菌水定容至15μl酶切体系，37℃条件下酶切2h；

4）电泳为1%的琼脂糖凝胶，将10μl PCR产物和3μl上样缓冲液混合后点样，120V电压下电泳30min，溴化乙锭染色后拍照；