[发明专利]一种息半夏的组织培养繁殖方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种息半夏的组织培养繁殖方法及用途。

背景技术

息半夏为天南星科半夏属多年生野生草本植物, 适应性强，喜温湿，耐低温，可与小麦等作物共生，在荒坡、堤埂与野草伴长。对土质、地力要求不严。无论砂土，粘土均能生长。其块茎可入药，是中国中药宝库中的一种重要药材。息半夏历史悠久，中外驰名。因息半夏因其个大、粉足、品质优良、疗效显著广受外商欢迎。国家将息半夏列为重点出口药材，远销美国、日本和东南亚各国。在香港市场上也很受欢迎。半夏的使用频率很高,据统计,在558 种中药处方中,半夏的使用频率居第22 位。半夏的传统药理作用很多,现代药理及临床研究表明,半夏具有抗癌、抗燥湿化痰、和胃止呕、咳喘、抗心率失常等作用。

近年来，随着市场经济的快速发展，息半夏远销日、韩及欧美市场，长期供不应求，国内各大药市常年出现有价无药的局面。但由于自然环境的破坏大量农药的使用和过度的采挖，导致半夏野生资源急剧减少; 而人工栽培由于受技术成本等因素的影响，发展缓慢，就形成了半夏野生资源越少越贵，越贵越挖，越挖越少的恶性循环。野生资源不断减少和息半夏栽培技术远远滞后三者之间矛盾的日益加剧，息半夏资源蕴藏量和产量都大幅下降，息半夏的野生资源供不应求, 人工栽培因繁殖率低及品种退化等问题限制了息半夏的产量和质量的提高, 价格居高不下。为了改变这种现状,应用现代生物学手段对其进行组织培养,建立息半夏无性系快速繁殖系统, 提高其繁殖系数; 增加种植面积，使农民增收，建立息野生半夏无性快速繁殖体系，为息半夏工厂化生产提供可重复的技术和依据。目前，现有技术中未见有关息半夏整套组织培养技术方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种息半夏组织培养繁殖方法。利用本发明的方法对息半夏进行大规模繁殖，以解决息半夏在天然状态下繁殖困难以及息半夏资源日益匮乏问题，实现息半夏的大规模人工种植，提高息半夏产量，以满足市场需求。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

息半夏组织培养繁殖技术，包括以下步骤：

一种息半夏的组织培养繁殖方法，其特征在于按如下的步骤进行：

(1)从大田直接采集息半夏，经室内种植后，利用新长出的叶片、叶柄作为外植体，消毒过后在接种到培养基上，然后以其叶片、叶柄作为外植体诱导愈伤组织；取息半夏叶片、叶柄，首先用70-75％(w/w)的酒精浸泡30-60s，再用0.1％(w/w)的升汞消毒5-10min，使用无菌水清洗5次，将其切成3-5mm大小的小块，接种在诱导愈伤培养基上暗培养30天，得到愈伤组织后，移至分化培养基上使其分化，分化的丛芽切成单个芽后使其在增殖培养基上继续生长。在温度为25℃，光照3000Lx，16h/d的光周期条件下培养30天，即可长出息半夏无菌苗；

(2)分别以步骤(1)的旱半夏无菌苗的叶片、叶柄为外植体，接入到MS添加6BA、NAA和白糖的培养基中，其中，MS培养基中6BA的浓度为 1.0-4.0mg/L，NAA的浓度为0.1-1.0mg/L，白糖的浓度为20-45mg/L，培养基的 pH值为5.8，琼脂粉为6-8g/L，在日产高压自动灭菌锅中，温度121℃下灭菌20min，冷却培养基至室温，在24-26℃，暗培养下，诱导愈伤组织；

(3)将步骤(2)中产生的愈伤组织接入MS添加6BA、NAA和白糖的培养基上，其中MS培养基中6BA的浓度为0.5.-2.0mg/L，NAA的浓度为0.1-2.0mg/L，白糖糖的浓度为20--45g/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期16h/d下培养20天，可萌发出不定芽;

(4)将步骤(3)中萌发出的丛生芽切成单芽，接入MS 添加6BA和IBA和蔗糖的培养基上，其中MS培养基中的浓度为6BA为0.1-1.0mg/L，IBA的浓度为0.5-2.0mg/L，蔗糖的浓度为20-45g/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期 16h/d下培养20天，待萌发出大量不定芽时进行生根培养;

(5)将步骤(4)中萌发出的息半夏不定芽切出后，在超净台中转入MS添加IBA的培养基中进行生根培养，其中，MS培养基中IBA的浓度为 1.0-4.0mg/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期16-20h/d下培养20天；

(6)当步骤(5)中已生根的息半夏组培苗生长至4-6cm时，根长到2-3cm时，根数4-7根左右时将瓶盖拧松半打开进行练苗3-5天；