[发明专利]一种样品总微生物及其总DNA的保护剂及保藏方法

说明书

本发明公开了一种样品总微生物及其总DNA的保护剂及保藏方法。样品总微生物及其总DNA的保护剂包括甘油、蔗糖、谷氨酸钠、聚乙二醇、EDTA二钠盐、柠檬酸钠、水和液体石蜡。所述样品总微生物及其总DNA的保藏方法包括以下步骤：将样品液加至滤膜膜面上进行抽滤，取下滤膜，以含样品的膜面为内膜面，将所述滤膜对折，放置于无菌袋内，向所述无菌袋内注入样品总微生物及其总DNA的保护剂至浸润透整张所述滤膜，排出空气后封口，冷冻保藏。本发明能够对现场采集的大量的微生物菌群样品进行快速简单地微缩处理，使样品便于保存和运输，能有效提高样品总微生物的存活率，有效防止总DNA降解，完整保存微生物的总DNA信息，操作简单，方便保藏。

技术领域

本发明涉及微生物保藏领域，具体涉及一种样品总微生物及其总DNA的保护剂及保藏方法。

背景技术

以往在进行生态环境微生物群落调查中，限于当时的分析技术和条件，往往在项目结束后，对所采集的样品没有加以重视和保留，这些样品包含了环境样品总微生物及其总DNA，是对采样点的微生物菌群信息最完整的记录，具有特殊性、唯一性和不可复制性。由于受技术的限制不能在现场对样品进行实时快速微缩处理，而采集到的样品往往所占体积较大，不易储存和运输，且在运输过程中随着运输时间的增加，样品中的微生物会发生变化甚至发生交叉污染，导致采集数据发生偏差。

随着分子生物学技术的快速发展，特别是基因组DNA测序分析方法的日益成熟完善，为环境微生物及其与环境因子之间的关系研究提供了有力的检测分析手段。若能有效地保存样品微生物的DNA，可用先进的分析方法对过去的实验结果进行比较和完善；或对某个区域内不同时期的环境样品进行比较，分析其变化，特别是与环境因素变化之间存在的关系。而且特定的时间、特定的气候、特定的理化条件和特定的生物环境，造就了特定的微生物群落结构和生物功能，因此，对于各时期采集到的样品总微生物及总DNA进行保藏，使其能够长时间的维持活性，可以保留各时期的微生物群落信息和基因库，其中包括可供利用和改造的功能基因片段和素材，具有非常重要的意义。

目前，我国有关样品总微生物及其总DNA的保藏方法还未有具体的记载。中国专利文献CN102994388B公开了一种菌种保藏液和菌种保藏方法。该菌种保藏液以100mL溶液计含有酵母粉1.2g-0.6g、氯化钠0.4g-1.0g、二甲亚砜2mL-10mL、甘油10mL-30mL、其余为水。该菌种保藏方法是将待保藏菌种加入上述菌种保藏液中，混合均匀，得到待保藏菌液。用无菌滤纸吸取待保藏菌液，得到无菌滤纸；用无菌透明胶带将含菌滤纸固定在无菌蜡纸上，然后置于冰箱中保藏。该保藏方法主要针对于已富集的菌种保藏，对于微生物的DNA的保存性能较低，不能长时间的维持微生物DNA的活性，且上述方法利用无菌滤纸吸取的方式仅适用于单一菌种保藏，不适用于多种微生物及其总DNA保藏。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中不能快速有效地保藏环境样品中的样品总微生物及其总DNA，从而提供一种保存期长、保存效果好的样品总微生物及其总DNA的保护剂及保藏方法。

为此，本发明提供了一种样品总微生物及其总DNA的保护剂，包括如下重量份的原料：甘油15-25重量份，蔗糖8-12重量份，谷氨酸钠5-9重量份，聚乙二醇0.5-2重量份，EDTA二钠盐0.1-0.5重量份，柠檬酸钠3-7重量份、水56-60重量份和液体石蜡50-150重量份。

所述的样品总微生物及其总DNA的保护剂，包括如下重量份的原料：甘油20重量份，蔗糖10重量份，谷氨酸钠7重量份，聚乙二醇1重量份，EDTA二钠盐0.37重量份，柠檬酸钠5重量份、水56.63重量份和液体石蜡100重量份。

本发明提供了一种样品总微生物及其总DNA的保藏方法，包括以下步骤：

(1)将样品液加至滤膜膜面上进行抽滤，取下滤膜，以含样品的膜面为内膜面，将所述滤膜对折，然后放置于无菌袋内；