[发明专利]一种基于血浆外泌体GRP78 mRNA的泛癌早期筛查试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于血浆外泌体中GRP78 mRNA的癌症早期筛查试剂盒，含有一对外泌体GRP78 mRNA荧光定量PCR引物，引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示。本发明可以仅仅利用5ml血液就能完成多种癌症的早期筛查，使得癌症的早期检测方法特异好、敏感、高效、实用，无创，可靠度高，易于各级医疗机构临床推广，也特别适用于肿瘤易感患者的体检筛查和早期预警，具有重要的意义价值。

技术领域

本发明涉及肺癌筛查技术领域，更具体地，涉及一种基于血浆外泌体GRP78 mRNA的癌症早期筛查试剂盒。

背景技术

癌症，是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。与良性肿瘤相比，恶性肿瘤生长速度快，呈浸润性生长，易发生出血、坏死、溃疡等，并常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。

每年大量患者癌症致死，预计未来25年全世界将有3亿人患肿瘤，其中1亿人因本病死亡。癌症将成为新世纪人类的第一杀手，并成为全球最大的公共卫生问题之一。目前我国各地医院的首诊病人早期癌仅占10％以下，90％以上都失去了战胜癌症的宝贵时机，因此，提高癌症早期发现率刻不容缓！世界卫生组织(WH O)明确指出：早期发现是提高癌症治疗率的关键。只要早期发现，90％的癌症完全可以治愈。认真做好癌症的早期发现、早期诊断及早期治疗工作，则癌症的死亡率可减少约三分之一。

目前缺少一种能够灵敏度高、使用简便、无痛苦、价格低廉、易于接受的筛查方法，使得癌症的早期筛查无法普及，无法在众多无症状的人群中发现更多的早期癌症患者和癌症高危人群。

外泌体是在细胞培养上清液和血浆、血清、唾液、尿液等体液中发现的一类，由细胞向胞外分泌的囊泡类小体。它们的直径约30-150纳米(nm)，具有典型的脂质双分子层膜结构，其内携带有母细胞的多种蛋白质、脂类物质、DNA、RNA (包括mRNA、IncRNA甚至其它小分子RNA)等。所有细胞都可以通过吐出、吸收这些小囊泡进行信息传递。癌症细胞也分泌大量的外泌体，里面含有特有的信号，用来诱导血管生长、抑制免疫系统，或者驯化人体的一些器官。很多证据表明，恶性肿瘤早期的分子事件是分泌外泌体，这要比循环肿瘤细胞、循环肿瘤 DNA要早很多。但是，实际应用工作中，并没有利用外泌体进行癌症早期筛查的试剂盒出现，外泌体中特定标志物的确定和选择是很重要的关键因素之一，目前尚无合适的外泌体标志物用于癌症早期检测。

发明内容

本发明提供了一种可用于癌症早期筛查的血浆外泌体特定标志物，即GRP78mRNA，可以利用血液就能完成多种癌症的早期筛查，使得癌症的早期检测方法特异好、敏感、高效、实用，无创，可靠度高，易于各级医疗机构临床推广，也特别适用于肿瘤易感患者的体检筛查和早期预警，具有重要的意义价值。

本发明的第一个目的是为了克服现有技术的不足，提供一对用于癌症早期筛查的特异性荧光定量RT-PCR检测引物。

本发明的第二个目的是提供一种所述的癌症早期筛查的特异性荧光定量RT -PCR检测引物在制备癌症早期筛查试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种基于血浆外泌体GRP78 mRNA的癌症早期筛查试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一对用于癌症早期筛查的特异性荧光定量RT-PCR检测引物，包括外泌体 GRP78mRNA荧光定量PCR上游引物和PCR下游引物，引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO：1～2所示。

所述的癌症早期筛的特异性荧光定量RT-PCR检测引物在制备癌症早期筛查试剂盒中的应用。