[发明专利]靶向动脉粥样硬化病灶的细胞膜仿生递药系统的制备方法及其产品和应用

说明书

技术领域

本发明属于药学领域，涉及靶向动脉粥样硬化病灶的细胞膜仿生递药的制备方法，还涉及由该方法制得的产品和应用。

背景技术

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种严重危害人类健康的常见病，是冠心病、脑梗死、外周血管病等缺血性心脑血管病的主要病理基础。迄今为止，AS的发病机制尚未完全阐明，存在多种学说，在这些学说中，炎症学说是最受认可的学说之一。该学说认为各种危险因素造成的动脉内膜损伤是动脉粥样硬化的始动环节。在这一过程中，活化的血管内皮细胞分泌一些粘附分子，如血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(inter cellular adhesion molecule-1，ICAM-1)等。这些粘附分子介导了内皮细胞与白细胞、血小板间的起始黏附，促进单核细胞在组织中的游走，增加与细胞间的相互作用，促使病损进一步发展，最终形成动脉粥样硬化斑块。

研究表明，巨噬细胞参与了动脉粥样硬化病理进程中的多个重要环节。在AS起始过程中，巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor，M-CSF)以及其他的分化因子驱使单核细胞分化成巨噬细胞；而在AS发展进程中，巨噬细胞促进斑块的形成、稀释纤维帽和坏死核心成分，由此导致炎性应答的增加和斑块内白细胞等凋亡信号的增强。在AS 病理进程中，巨噬细胞膜表面蛋白发挥着重要作用。研究表明，巨噬细胞表面已知的蛋白大概有1000多种，其中有458种是经GOA注释的膜蛋白，包括CD11b、CD14、CD18、CD40、 CD86、CD44、CD16等，这些蛋白功能各异。如CD40可以通过与可溶性CD40配体(CD40 ligand，CD40L)结合，调节多种细胞因子、趋化因子、黏附分子和生长因子等的表达，促进 AS相关炎症、免疫反应，诱导AS斑块发生进展，增加斑块的易损性；C-反应蛋白(c-reactive protein，CRP)可以促进VCAM-1、ICAM-1、E-选择素以及单核细胞趋化蛋白(monocytes chemoattractant protein-1，MCP-1)的表达，促进炎症反应的发生，是AS发展中的重要炎性标志物。

近年来，应用细胞膜包裹纳米粒这一仿生策略在多种疾病的靶向递药研究中取得较大进展。细胞膜包裹纳米粒是将细胞膜包覆在纳米颗粒表面所制备而成的一种新型药物递送载体和仿生纳米材料，将细胞膜与纳米粒结合，不仅能增加纳米粒的生物相容性，还可以通过选择不同种类细胞的细胞膜，如血细胞、干细胞或细菌细胞等，使得纳米粒“穿衣”后获得原先细胞的部分功能。文献报道，巨噬细胞膜包裹的仿生纳米递药系统，已被用于构建靶向肺转移乳腺癌的仿生递药系统，体现出用于病灶精准治疗的良好潜力，但是未见巨噬细胞膜包裹的纳米粒靶向动脉粥样硬化病灶的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种靶向动脉粥样硬化病灶的细胞膜仿生递药系统的制备方法；本发明的目的之二在于提供由所述制备方法制得的细胞膜仿生递药系统；本发明的目的之三在于提供所述的细胞膜仿生递药系统在制备抗动脉粥样硬化载药系统中应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

靶向动脉粥样硬化病灶的细胞膜仿生递药系统的制备方法，包括如下步骤：提取巨噬细胞膜，经反复挤压制成巨噬细胞膜囊泡，然后与聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒混合，过滤膜反复挤压制成细胞膜仿生递药系统。

优选的，所述提取巨噬细胞膜的方法如下：收集巨噬细胞，加入4℃TM buffer重悬，调整细胞悬液浓度为2.5×10⁷/mL，用微型均质机来回挤压破碎细胞膜20次，加入浓度为1 mol·L^-1的蔗糖与细胞匀浆混合，使蔗糖终浓度为0.25mol·L^-1，接着先在4℃、2000g离心10min，取上清液；再在4℃、3000g离心30min，弃去上清液；最后加入4℃含0.25mol·L^-1蔗糖TM buffer重悬，4℃，3000g离心30min，弃去上清液，管底沉淀物即为巨噬细胞膜，-20℃保存；所述TM buffer各组分如下：pH 7.4,0.01mol·L^-1Tris、0.001mol·L^-1MgCl。

优选的，所述巨噬细胞膜囊泡由巨噬细胞膜用微型均质机反复挤压制成。