[发明专利]一种同时检测四种外来和新发动物疫病的液相蛋白芯片试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及液相蛋白芯片的技术领域，尤其是涉及用于同时检测多种动物疫病的液相蛋白芯片技术。

背景技术

小反刍兽疫(peste des petits ruminants，PPR)俗称羊瘟，又名小反刍兽假性牛瘟、肺肠炎，是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants Virus，PPRV)引起的一种急性、热性和高度传染性的烈性传染病，主要感染山羊和绵羊，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。牛呈隐形感染，感染后也不会传染其它动物。羊发病后一般一般预后不良，多为死亡。该病和牛瘟发病症状和病理变化具有高度相似性。

水泡性口炎(Vesicular Stomatitis,VS)又名伪口疮，该病是通过弹状病毒科(Rhabdoviridae)水泡病毒属(Vesiculovirus)的水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)引起的一种急性、高度接触性传染的病毒性疾病，VSV具有高度的嗜上皮性，是引起多种哺乳动物水泡性口炎的重要病原，其中以感染马、牛、猪等最为普遍，临床上以在感染动物的口腔薄膜、舌、唇、乳头和蹄冠等部位的皮肤、薄膜发生水泡为特征，与口蹄疫(Foot and mouth disease,FMDV)临床症状不易区别。此外，VSV可因接触而感染人，出现流感样临床症状，因此该病也是一种高度接触性人兽共患传染病。

水泡性口炎在世界许多国家和地区广泛流行，给畜牧业造成了严重的经济损失，世界动物卫生组织Office International Des Epizooties(OIE)将该病列为动物A类传染病，由于该病在我国出现较少，因此我国为二类进境动物传染病。随着近年来入境活动物及动物产品量的增加，该病传入我国的风险也随之上升，因此更需要直接、高通量的检测方法提供技术支持。

蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)，属呼肠孤病毒科、环状病毒属、蓝舌病病毒亚群(Bluetinguevirus subgroup)，BTV引起的蓝舌病(BT)是由虫媒传播的非接触性反刍动物急性传染病，尤其对纯种细毛羊敏感，死亡率高达35％，OIE将其列为实时通报疫病，我国将其规定为一类动物传染病。该病分布范围不断扩大，危害也日趋严重。我国于1979年发现该病存在，现已从全国29省检出BTV血清阳性家畜。

2011年夏秋季节，德国和荷兰一些牛场出现一种未知疾病，成年病牛出现发热(＞40℃)、体质下降、食欲不振、腹泻和产奶量下降(高达50％)等临床症状，怀孕母牛出现流产、产畸形胎、死胎或弱胎等症状。2011年11月，德国弗里德里希洛弗勒研究所利用宏基因组学和病毒分离技术最终确证导致此次疫情的病原体为一种新的布尼亚病毒，并根据分离地名将其命名为“施马伦贝格病毒”(Schmallenberg virus，SBV)，将其引起的疫病称为“施马伦贝格病”。2012年1月4日，荷兰首先向世界动物卫生组织(OIE)通报该国出现施马伦贝格病疫情，随后，比利时、德国、英国、法国、卢森堡、意大利和西班牙等国家相继向OIE通报疫情。随着疫情的变化和科学研究的逐渐深入，欧盟方面认为施马伦贝格病对畜牧业生产的影响有限，并坚持认为将该病列为OIE通报性疫病有违疫病名录收录标准。因此，从2012年9月起OIE不再通报施马伦贝格病疫情。尽管已有研究表明，该病对非怀孕期的成年牛、羊等家畜影响有限，但易造成怀孕母畜流产、产死胎或畸形胎儿。虽然中国尚未出现施马伦贝格病疫情，但是考虑到该病的传播媒介——库蠓在中国分布广泛、种类繁多，加之中国牛、羊等家畜养殖量大、饲养密度高，该病对中国畜牧业生产具有潜在威胁。

目前，能够检测上述四种疫病抗体水平的技术主要有免疫荧光技术、酶联免疫吸附试验等方法。这些方法有一个共同的缺点：一次试验只能检测一种病原抗体水平，无法实现对多种病原抗体的实时监测。

发明内容

本发明的目的在于克服现有不足，提供一种能同时检测四种外来和新发动物疫病的液相蛋白芯片试剂盒，可实现一份微量样本同时检测数个动物疫病，血清用量少、检测时间短、灵敏度高、操作简单。

本发明一方面是提供制备一种同时检测四种外来和新发动物疫病的液相蛋白芯片试剂盒的技术方案，所述试剂盒包括直径和材料相同但编码不同的四种用于偶联抗原的微球，所述偶联抗原的微球包括第一微球、第二微球、第三微球和第四微球，其中，