[发明专利]一种蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法

权利要求书

1.一种蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：将2-四氢糠酸乙酯、碱性蛋白酶和甲苯加入磷酸盐缓冲液中，然后在0～20℃条件下进行水解反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得(S)-2-四氢糠酸乙酯和(R)-2-四氢糠酸；所述碱性蛋白酶为日本田野Protease P6蛋白酶；所述甲苯、所述2-四氢糠酸乙酯和所述碱性蛋白酶的质量比为1:303.03-310.94:3.03-3.27；所述甲苯与所述磷酸盐缓冲液的体积比为1:10；

所述分离纯化按以下步骤进行：

将反应液过滤，获得滤液和滤饼，滤饼回收酶，滤液调节pH值至2-3，再加入有机溶剂进行萃取，分液得到有机层和水层；

将有机层用碱液洗涤，然后用无水硫酸钠进行干燥得有机相，浓缩所述有机相得淡黄色液体(S)-2-四氢糠酸乙酯；

将水层调节pH值至2-3，减压蒸馏获得(R)-2-四氢糠酸。

2.根据权利要求1所述的蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，所述水解反应在0～20℃条件下反应24～72h。

3.根据权利要求2所述的蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，所述2-四氢糠酸乙酯为外消旋2-四氢糠酸乙酯。

4.根据权利要求1所述的蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH＝8。

5.根据权利要求1所述的蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，所述有机溶剂包括乙酸乙酯、甲基叔丁基醚和甲苯中的一种。

6.根据权利要求5所述的蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，所述碱液为饱和NaHCO₃溶液和饱和Na₂CO₃溶液中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的蛋白酶拆分制备手性2-四氢糠酸的方法，其特征在于，所述蛋白酶的活性为6万～10万U/g。