[发明专利]一种同时测定普鲁卡因、青霉素和链霉素含量的液相色谱分析方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种同时测定普鲁卡因、青霉素和链霉素含量的液相色谱分析方法。

背景技术

目前，美国药典已收录了“普鲁卡因青霉素-硫酸双氢链霉素注射液”的质量标准，在美国药典、欧洲药典、英国药典中对制剂中青霉素含量测定采用碘量法，该测定方法不完善、选择性差，干扰因素多，国内尚未制定青霉素复方制剂的含量测定标准方法。而碘量法是基于氧化还原滴定的原理，要求较快完成滴定过程，配方中若使用的抗氧剂或其它辅料均可干扰滴定过程及结果，淀粉指示液加入时间点的把握等均可增大滴定结果的误差。

链霉素采用抗生素微生物鉴定法中的浊度法进行测定。链霉素含量原理是检测供试品对标准菌株的抗菌活性与标准品相比较计算得到，其检测时间长(≥24h)、含量检测误差大，不利于半成品的质量控制。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种同时测定普鲁卡因、青霉素和链霉素含量的液相色谱分析方法，旨在解决现有检测方法中检测不准确、检测时间长等技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种同时测定普鲁卡因、青霉素和链霉素含量的液相色谱分析方法，包括以下步骤：

1)分别将普鲁卡因、青霉素和链霉素的标准品用流动相溶解，分别配制成浓度为2mg·mL^-1、2mg·mL^-1和2mg·mL^-1的溶液，再分别滤去杂质，制成普鲁卡因、青霉素和链霉素对照品标准溶液待用。

2)将普鲁卡因、青霉素和/或链霉素的供试品用流动相溶解，配制成浓度1.0mg/ml的溶液，过滤，制成供试品溶液待用。

3)分别取步骤1)配制的普鲁卡因、青霉素和链霉素对照品标准溶液，配制梯度浓度的标准溶液；然后分别使用液相色谱在检测波长190～250nm下进行分析，并根据分析得到的液相色谱分别绘制普鲁卡因、青霉素和链霉素的标准曲线。

4)在步骤3)的相同液相色谱条件下检测步骤2)制得的供试品溶液，再利用步骤3)得到的普鲁卡因、青霉素和链霉素的标准曲线来计算普鲁卡因、青霉素/或链霉素的含量。

其中：在步骤1)中，所述的流动相为有机相与含离子对的磷酸缓冲液的混合物；其中，有机相与含离子对的磷酸缓冲液的体积比为(5～30)：(70～95)，所述的有机相为乙腈或甲醇，所述的含离子对的磷酸缓冲液为硫酸钠、辛烷磺酸钠、磷酸二氢钾和磷酸的混合水溶液。

所述的含离子对的磷酸缓冲液的配制方法为：将15.91g无水硫酸钠、1.7g辛烷磺酸钠溶解于700mL水中，再加入57mL磷酸盐缓冲溶液，加水定容至1000mL制得；其中，磷酸盐缓冲溶液为浓度为27.2g/L磷酸二氢钾用浓度为22.5g/L的磷酸调节pH至3.0得到。

优选地，有机相与含离子对的磷酸缓冲液的体积比为12：88。

在步骤3)和4)的液相色谱中，流速为0.3～1.5mL/min，柱温为25～40℃，进样量为20μL。

优选地，所述的检测波长为205nm；所述的流速为1.0mL/min。所述的柱温为40℃。

在步骤3)和4)的液相色谱中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。

为了提高准确性，重复步骤4)一次以上，取平均值进行计算普鲁卡因、青霉素/或链霉素的含量。

本发明用普通十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以离子对缓冲液—有机相作为流动相对普鲁卡因、青霉素、链霉素三种成分进行等度洗脱，这是因为普鲁卡因为有机碱，青霉素为有机酸，链霉素为有机碱类离子化合物，其中链霉素电离能力强，在反相色谱系统中介乎无保留。因此选择链霉素的色谱条件是本发明的关键技术之一。本发明选用离子对试剂作用与链霉素，使链霉素能在反相色谱柱上保留，同时通过流动相pH值、有机相比例共同使链霉素达到最佳的分离和保留；普鲁卡因为有机碱，在酸性条件下能快速洗脱，减少有机相比例延长普鲁卡因的保留时间；青霉素为有机酸在酸性流动相也可得到很好；三种成分中，链霉素紫外特征最弱，经试验筛选205nm作为检测波长，普鲁卡因、青霉素在205nm波长有良好的响应；本发明中先从戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠中筛选出适用于链霉素分离的离子对试剂，最终却辛烷磺酸钠作为分析链霉素的离子对试剂；碱性离子对试剂的加入会延长普鲁卡因的保留时间，在不影响链霉素保留时间加入约15％乙腈，增强普鲁卡因和青霉素的洗脱。

与现有的技术相比，本发明具有如下有益效果：