[发明专利]一种CRISPR/Cas9随机文库及其构建和应用在审
| 申请号： | 201711180206.7 | 申请日： | 2017-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN108103586A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 周建奎;黄行许 | 申请（专利权）人： | 上海科技大学 |
| 主分类号： | C40B40/06 | 分类号： | C40B40/06;C40B50/06;C12N15/10;C12N15/113 |
| 代理公司： | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人： | 翁若莹 |
| 地址： | 200120 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 随机文库 高通量 核苷酸 构建 功能基因组学 基因组功能 功能注释 有效工具 通用的 偏好 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种CRISPR/Cas9随机文库，其特征在于，包括sgRNA，所述的sgRNA含有识别序列，其中该序列的20个核苷酸第1个为G，2至20个为随机的核苷酸N。
2.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9随机文库，其特征在于，所述的识别序列为随机识别序列。
3.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9随机文库，其特征在于，所述的sgRNA包含骨架部分和随机识别序列组成。
4.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9随机文库，其特征在于，所述的随机sgRNA还包含T7启动子序列。
5.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9随机文库，其特征在于，所述的随机sgRNA的序列为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3。
6.权利要求1-4中任一项所述的CRISPR/Cas9随机文库的构建方法，其特征在于，包括：采用将sgRNA识别序列的20个核苷酸第1个设定为G，2至20个设定为随机N的策略，通过随机引物合成、退火、补齐双链后，进行纯化后得到随机体外转录模板；对sgRNA进行体外转录，纯化后，得到sgRNA随机文库。
7.如权利要求6所述的CRISPR/Cas9随机文库的构建方法，其特征在于，所述的随机体外转录模板的序列包含SEQ ID NO：3。
8.权利要求1-4中任一项所述的CRISPR/Cas9随机文库在基因组突变中的应用。
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