[发明专利]一种体外受精专用胚胎培养矿物油及其制备方法

说明书

本发明公开了一种体外受精专用胚胎培养矿物油及其制备方法，以轻质石蜡油为原料，萃取剂为磷酸二异辛酯，溶剂为超纯水，经抗坏血酸、半胱氨酸、氯化钠溶液纯化后得到矿物油，纯化处理效果显著，可有效降低培养液的内毒素含量、过氧化值以及重金属含量，得到的矿物油品质可达到甚至超过国外产品，避免了国外产品因长途运输带来的不明因素，同时纯化工艺操作简单合理，检测严密，能够提供新鲜的胚胎培养矿物油供生殖中心或科研院所使用，具有良好的市场前景。

技术领域

本发明涉及领域人工辅助生殖技术，具体涉及一种体外受精专用胚胎培养矿物油及其制备方法。

背景技术

体外受精(In Vitro Fertilization)是指人的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。自从世界上第一个“试管”婴孩于1978年7月25日在英国出生后，到2012年7月1日已有500万个“试管”婴孩诞生。用矿物油覆盖培养液已长期用于哺乳动物受精卵和胚胎的体外培养,现在体外生产胚胎通常用微滴或四孔板覆盖石蜡油进行培养,这项技术可用少量培养液进行胚胎培养从而避免了液体蒸发。同时覆盖矿物油可以隔绝培养液和外部环境，有利于保持培养液pH值、渗透压及湿度的稳定性，防止培养液环境受污染。

体外胚胎培养会受到多方因素影响，如培养液成分、pH值、环境、卵母细胞质量等，因此作为与体外培养液直接接触的矿物油也对胚胎发育产生一定的影响。成俊萍等人曾对不同来源，不同品牌的矿物油进行比较研究，如Ameresco油、Sigma过滤油和Sigma胚胎培养油，发现其对胚胎体外培养过程有直接的影响。

矿物油原料中含有过氧化物、活性氧和锌等有害成分，需要经过多次纯化处理之后才能用于体外受精胚胎培养实验。目前胚胎培养矿物油的纯化技术属于未公开技术，我国因纯化处理技术欠缺，常用的矿物油主要是来源于国外进口，如sigma石蜡油(M-8410)。长期依赖进口成品，不仅会导致其成本高，且进口的胚胎培养矿物油质量参差不齐，并且需长途运输，而运输过程中的不明因素也可能对产品品质造成严重影响，如果使用质量较差的矿物油，将对实验和临床造成不可逆转的结果。因此，找到一种高效纯化矿物石蜡油的新方法，为我国自主生产胚胎培养矿物油提供有力保证是亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明在于提供一种各项指标达到体外受精专用胚胎培养矿物油的标准，使用安全，品质优良的胚胎培养矿物油，为我国辅助生殖技术提供有力保证。

为了达到上述的目的，本发明提供的一种体外受精专用胚胎培养矿物油，主要成分包括石蜡油、超纯水、还原剂、氯化钠，萃取剂和稀释剂。

生产矿物油所采用的技术方案是：

1.还原剂的配制

准确称量1-3.5g抗坏血酸，置于装有100mL超纯水的烧杯中，用玻璃棒不断搅拌溶解；

准确称量1-5g半胱氨酸，置于装有100mL超纯水的烧杯中，用玻璃棒不断搅拌溶解。

2.氯化钠溶液的配制

准确称量0.5-1.7g氯化钠，置于装有100mL超纯水的烧杯中，用玻璃棒不断搅拌溶解。

3.萃取剂的配制

以磷酸二异辛酯为萃取剂，磺化煤油作为萃取剂稀释剂，按相比O/A为4:6稀释配制萃取剂p204。

4.体外受精专用胚胎培养矿物油的处理

具体操作过程包括以下步骤：

A)取石蜡油置入器皿中，然后以石蜡油：半胱氨酸的体积比＝1:(1-3)加入半胱氨酸作为第一还原剂，1000-1200r/min搅拌5-30min，待石蜡油与水静置分层后，分液得到第一石蜡油；