[发明专利]一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法

权利要求书

1.一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法，包括以下步骤：

浓缩液制备：取培养后的小球藻藻液1L，离心10-15分钟，去掉所得上清液，留沉淀；将沉淀用缓冲液重悬浮，重复离心3-4次；将离心出的所有藻液进行合并，并用缓冲液稀释，终体积为200-220mL，于0-4℃温度下储存备用；所述缓冲液为pH为7.8-7.9的Tris-HCl缓冲溶液；

发酵：按照3.5-5.0%接种经培养后的小球藻，发酵72-96小时得发酵液；所述发酵过程中发酵温度为30-33℃、pH为6.9-7.2、搅拌速度为320-340r/min、通气量0.65-0.85vvm；

酶液制备：将发酵液在0-4℃、3500-5000r/min条件下离心10-15分钟，将沉淀用缓冲液重悬浮后重复离心2-3次，合并沉淀；将沉淀溶于缓冲液后用超声破碎仪破碎细胞，离心后留上清液，沉淀部分用缓冲液进行重悬浮，重复离心3-5次合并上清液，低温浓缩至200-220mL后于0-4℃保存备用；

配制：于3-4℃条件下，将小球藻浓缩液与小球藻酶液按1:0.5-3.0的体积混合，混合液密封后，置于装有冰水的三角瓶中，在20-22℃、200-220r/min条件下振荡混合10-13分钟，以5-6:1的体积添加稳定剂，即得生物表面活性剂；

所述酶液制备步骤中的超声破碎仪功率为1.0-1.3kW，探头振幅为38-45%，温度为2-4℃，时间为30-48分钟；

所述配置步骤中的稳定剂为18-23%甘油、1.0-1.5mM EDTA、0.1-0.13mM DTT以及0.5μM(1S,2S,5S)-2-羟基蒎烷-3-酮，其pH为7.5-7.7。

2.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法，其特征在于：所述浓缩液制备步骤中的离心温度为0-4℃，转速为3500-5000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法，其特征在于：所述发酵步骤中的发酵培养基组成及其含量为：葡萄糖38-40g/L、玉米浆粉6-8g/L、蛋白胨4-5g/L、NaCl 12.5-15.0g/L、(NH₄)₂SO₄ 1.65-1.70g/L、MgSO₄·7H₂O 2.2-2.5g/L、KCl 0.5-0.6g/L、KH₂PO₄ 0.5-0.6g/L、CaCl₂ 0.1-0.12g/L，121-122℃条件下进行高压蒸汽灭菌15-30分钟。

4.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法，其特征在于：所述酶液制备步骤中的离心温度为0-4℃，转速为11500-12000r/min，离心时间为15-20分钟。