[发明专利]一种谷氨酸产生菌活菌胶囊发酵生产γ-聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一种谷氨酸产生菌活菌胶囊发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，步骤如下：

（1）谷氨酸产生菌活菌胶囊的制备

将黄色短杆菌种子液在4 000～6 000r/min离心3～5min，弃去上清，再加入同体积的生理盐水得菌悬液；将10～20g/L海藻酸钠溶液与黄色短杆菌菌悬液按10:1混合均匀，用一次性注射器滴入到25～35g/L 搅拌着的CaCl₂溶液中，固化60～120min，灭菌水冲洗，然后将其置于3～7g/L普鲁兰多糖溶液中缓慢成膜10～50min，再用 0.05%普鲁兰多糖溶液覆膜3～18min，得到谷氨酸产生菌活菌胶囊；

（2）发酵

以5%的接种量接种枯草芽孢杆菌，并同时接种5%谷氨酸产生菌活菌胶囊进行混合发酵培养即得γ-聚谷氨酸；

发酵结束后回收谷氨酸产生菌活菌胶囊：将发酵液用盐酸调pH 2.5～3.5，过滤回收谷氨酸产生菌活菌胶囊，同时，向滤液中加入无水乙醇沉淀，干燥，得到聚谷氨酸粗品；

所述谷氨酸产生菌活菌胶囊回收后用于下一批次发酵；发酵批次大于20次。

2.如权利要求1所述的谷氨酸产生菌活菌胶囊发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述黄色短杆菌种子液的制备方法是：将黄色短杆菌接种于装有种子培养基的三角瓶中，接种量1%，32～35℃、150r/min培养，培养至种子液OD₆₀₀达到1.4～1.7；

所述黄色短杆菌的种子培养基的组成是：葡萄糖20～30g/L，尿素3～6g/L，酵母膏2～4g/L，MgSO₄ 0.1～0.5g/L，K₂HPO₄ 1～4g/L，pH 7.2～7.5。

3.如权利要求1所述的谷氨酸产生菌活菌胶囊发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述枯草芽孢杆菌的培养方法是：将枯草芽孢杆菌接种于装有种子培养基的三角瓶中，接种量1%，于32～37℃，180～220r/min摇床震荡培养至OD₆₀₀达到1.8～2.2；

所述枯草芽孢杆菌的种子培养基组成是：葡萄糖5～10g/L，酵母粉3～5g/L，硫酸铵2～10g/L，MgSO₄ 0.1～1.0g/L，pH 7.2～7.5。

4.如权利要求1所述的谷氨酸产生菌活菌胶囊发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述步骤（2）发酵过程中所用发酵培养基：柠檬酸 2～5g/L，尿素3～6g/L，蛋白胨20～40g/L，MgSO₄ 0.1～0.5g/L，K₂HPO₄ 1～4g/L，葡萄糖100～200g/L，pH 7.2～7.5。

5.如权利要求1所述的谷氨酸产生菌活菌胶囊发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述步骤（2）发酵过程中发酵条件是：以5%的接种量接种枯草芽孢杆菌，并同时接种5%谷氨酸产生菌活菌胶囊进行混合发酵培养；温度32～37℃，发酵罐条件下通气搅拌培养：转速100～300rpm、罐压0.05～0.1MPa或摇瓶振荡培养150～250r/min，发酵时间64～72h，pH不控制。