[发明专利]一种三七多糖的制备方法

说明书

本发明涉及一种三七多糖的制备方法，其按以下步骤进行：粉碎、浸泡、去油脂和色素、水煮离心、醇提、抽干、色谱分离。本发明的三七多糖提取制备方法，所得提取物中三七多糖含量远高于常规方法，其他成分和杂质含量也较常规提取低。

技术领域

本发明涉及一种提取物的制备方法，特别是一种三七多糖的制备方法。

背景技术

十几年来，国内外学者从药用植物中提取了众多的具免疫调节和抗肿瘤活性的多糖，并且其中一些已进入I临床阶段，应用于化疗、放疗后免疫力的恢复等方面。现在对糖类的研究集中在对药理学有特殊意义的免疫系统中的生物信息受体识别与粘合，即免疫调节作用。然而由于多糖在天然产物中含量低，分离提取困难，且结构十分复杂，因此对多糖的细胞分子作用机理尚缺乏较深入的了解。

多糖是存在于自然界的醛糖和酮糖通过糖苷键连接在一起的多聚物，是构成生命的四大基本物质之一。近年来，人们发现多糖及糖缀合物(如糖蛋白、糖脂等)参与了细胞各种生命现象的调节，如免疫细胞间信息的传递和感受，这与细胞表面的多糖体的介导有密切关系。糖作为一种分子表面“识别标志”，参与体内许多生理和病理过程，如炎症反应中自细胞和内皮细胞的粘连，细菌、病毒对宿主细胞的感染，抗原抗体的免疫识别等。自身免疫疾病大多涉及炎症反应过程，目前已有报道用阻断白细胞与内皮细胞粘连的糖配体抑制剂，如可溶性糖多聚物或糖复合物等，可减轻炎症反应。此外，有大量的药理和临床研究表明，多糖类化合物是一种免疫调节剂，它能激活免疫细胞，提高机体的免疫功能，而对正常细胞没有毒副作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种三七多糖的提取制备方法，本发明的三七多糖提取制备方法，所得提取物中三七多糖含量远高于常规方法，其他成分和杂质含量也较常规提取低。

一种三七多糖的制备方法，其特征在于三七多糖的提取按以下步骤进行：将粉碎后的三七用无水乙醇浸泡抽去油脂和色素，药渣风干后水煮60 rain，离心，沉淀中加入蒸馏水再煮60 min，重复2～3次，弃沉淀，合并上清液(棕黄色)，减压浓缩，上清液加入3倍体积95% 乙醇，静置24 h，离心收集沉淀。沉淀经无水乙醇、丙酮分别洗涤2次，用抽滤漏斗抽干，P₂O₅干燥，中性蛋白酶结合Sevag法脱蛋白得粗多糖。

一种三七多糖的制备方法，其特征在于三七多糖的纯化按以下步骤进行：粗多糖溶解在PBS中，离心除去不溶物，上清液过DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子色谱柱进行色谱分离，用0～ 0.8 mol/L NaCL-PBS溶液梯度洗脱(pH7.6)，以苯酚-硫酸法测490nm 处吸光度值(A₄₉₀)，做洗脱曲线，合并主峰部分，冻干，获得三七多糖PNPS I、PNPSⅡ组分。分别称取等量PNPS I、PNPSⅡ组分，溶于蒸馏水，过CM-Sepharose Fast Flow阴离子色谱柱，用pH5.0的缓冲液(2.5 mmol/L NaAc-HAc)梯度洗脱，盐梯度为O～0.5 mol/L NaCL，收集组分，以苯酚一硫酸法 测定A₄₉₀，作洗脱曲线，合并主峰，冻干得三七多糖。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

本发明解决技术问题的技术方案是：

实施例1 ：

将粉碎后的三七用无水乙醇浸泡抽去油脂和色素，药渣风干后水煮60 rain，离心，沉淀中加入蒸馏水再煮60 min，重复2～3次，弃沉淀，合并上清液(棕黄色)，减压浓缩，上清液加入3倍体积95% 乙醇，静置24 h，离心收集沉淀。沉淀经无水乙醇、丙酮分别洗涤2次，用抽滤漏斗抽干，P2O5干燥，中性蛋白酶结合Sevag法脱蛋白得粗多糖。