[发明专利]一种小球藻多糖的制备方法

说明书

本发明涉及一种小球藻多糖的制备方法，其按以下步骤进行：破壁、膜过滤、洗脱、水冷冻干燥。本发明的小球藻多糖提取制备方法，所得提取物中小球藻多糖含量远高于常规方法，其他成分和杂质含量也较常规提取低。

技术领域

本发明涉及一种提取物的制备方法，特别是一种小球藻多糖的制备方法。

背景技术

小球藻是一类普生性单细胞绿藻，含有丰富的蛋白质、多糖、脂质、叶绿素、维生素、微量元素和一些生物活性代谢产物，有“药物藻类”之美誉l1J。有研究表明，小球藻干粉或其提取物能使免疫低下小鼠的细胞免疫功能有所恢复 。Tanaka等报道小球藻提取物在小鼠抗肿瘤MethA的作用中，需要抑制性T淋巴细胞的参与，即通过淋巴器官中T细胞的活化，并增强肿瘤部位T细胞的补充来抑制肿瘤转移。Hasegawa等l5I研究给予白血病小鼠小球藻后，可恢复其对单核增生李斯特氏菌的清除力，感染部位的T细胞数目增加。

多糖是小球藻提取液中主要的活性成分之一，在抗肿瘤、抗病源菌、抗病毒方面具有显著效果。

发明内容

一种小球藻多糖的制备方法，其按以下步骤进行：

1) 准确称取小球藻粉末20 g溶于400 mL水中，在室温下不断搅拌溶胀4 h；

2) 在47℃环境中向小球藻溶液中缓慢加入NaOH粉末至NaOH浓度达到4%，并不断搅拌；

3) 在47℃环境中，超声-碱液破壁25 min，调节pH至7，2000 rpm离心20 min，取上清液，4℃冷却后备用；

4) 于4℃环境中，加入4倍体积于上清液的冰镇95%乙醇，持续搅拌1 min，静置5 h，2000 rpm离心20 min，去上清液，去除沉淀残余表面酒精，收集沉淀，用0.1 mol/L pH=6的PBS溶液溶解沉淀，4℃保存备用；

5)加入复合风味蛋白酶，50℃环境中酶解5 h，期间每半小时调节pH为6；

6) 将酶解液置于沸水中15 min，8000 rpm离心10 min，取上清液，于旋转蒸发仪中浓缩上清液，即为小球藻粗提溶液，4℃保存；

7）制备的粗提取液用0.22 μm超滤膜除去大分子及杂质，以0.1 mol/L pH=6.8的PBS溶液为洗脱液，0.33 mL/min的速度进行洗脱，收集小球藻多糖，冷冻干燥即为纯化后的小球藻多糖。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

本发明解决技术问题的技术方案是：

实施例1 ：

1) 准确称取小球藻粉末20 g溶于400 mL水中，在室温下不断搅拌溶胀4 h；

2) 在47℃环境中向小球藻溶液中缓慢加入NaOH粉末至NaOH浓度达到4%，并不断搅拌；

3) 在47℃环境中，超声-碱液破壁25 min，调节pH至7，2000 rpm离心20 min，取上清液，4℃冷却后备用；

4) 于4℃环境中，加入4倍体积于上清液的冰镇95%乙醇，持续搅拌1 min，静置5 h，2000 rpm离心20 min，去上清液，去除沉淀残余表面酒精，收集沉淀，用0.1 mol/L pH=6的PBS溶液溶解沉淀，4℃保存备用；

5)加入复合风味蛋白酶，50℃环境中酶解5 h，期间每半小时调节pH为6；

6) 将酶解液置于沸水中15 min，8000 rpm离心10 min，取上清液，于旋转蒸发仪中浓缩上清液，即为小球藻粗提溶液，4℃保存；