[发明专利]猕猴桃种子的无菌采集方法

说明书

本发明涉及一种猕猴桃种子的无菌采集方法，所述方法包括选取健康、成熟的猕猴桃果实，对器具进行灭菌，然后在超净工作台上剥皮处理后置于灭过菌的蒸馏水中搅拌，然后冲洗饱满健康的种子。本发明操作简单，利用本发明所采集的猕猴桃种子高效且完全无菌，去除了实验过程中消毒杀菌的部分，减小了实验量，对环境无害，对要求无菌操作的猕猴桃种子的相关实验有很大的价值。

技术领域

本发明属于果树育种技术领域，具体涉及一种实验室用猕猴桃种子的无菌采集方法。

背景技术

猕猴桃是浆果类果树的一种，其种子镶嵌在果肉中且十分小，取种工作比较困难。目前，采集猕猴桃种子使用较多的方法是先将猕猴桃存放，待其完全成熟软化后，把猕猴桃内部的果肉和种子一齐揉挤出来，装进纱布袋子里反复揉搓，待果汁被挤尽之后，再用水反复淘洗，淘洗过程可清除漂浮的杂质和空种粒。洗干净的种子，最后还需摊开晾晒。虽然这种方法可获得大量的种子，但缺点也很明显，等待软化、分摊晾晒均需要耗费大量时间，反复淘洗又会对水资源造成浪费，反复揉搓也需耗费人力物力，整个过程繁琐，增加了育种时间，提高了生产成本。

近些年，报道了一些发明人对猕猴桃种子的采集方法进行了改进（例如中国专利申请201210230778.2，公开了一种猕猴桃种子的采集方法，包括放置成熟、切片、平铺粘贴、干燥处理、收集、后处理等步骤），或设计出了猕猴桃种子采集机器（例如中国专利申请201611198460.5，公开了一种便于取出猕猴桃种子的设备），在缩短取种时间、降低资源浪费方面做出了很大贡献，但是，这些方法或设备采集的猕猴桃种子均是裸露在空气中，使本来无菌的种子带上了细菌。果树育种领域技术人员已知的是，胚乳培养是倍性育种的常用手段，猕猴桃属于被子植物且是雌雄异株，双受精作用致使其种子的胚乳属于三倍体组织，通过对其胚乳的离体培养，对改善猕猴桃的食用品质、选育无籽猕猴桃等方面均有重要的意义。然而，实验室中，胚乳的离体培养需要严格的无菌种子，而现有的方法所取的种子都是带菌的，做实验前还需要使用升汞进行消毒杀菌，加重了实验量，消耗的升汞对环境有一定的危害，整个操作也比较复杂。

鉴于此，研究一种适用于实验室的无菌采集猕猴桃种子的方法是非常有必要的。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的旨在探究一种耗材少、节水、对环境无害且高效的实验室无菌采集猕猴桃种子的方法。猕猴桃的种子是嵌入在果肉内部的，有果肉、果皮两个防护罩，与外界有菌环境完全隔绝，其是完全无菌的。本发明利用了这一点，设计的实验过程确保在采集种子过程中种子不会接触到有菌环境，因此，取出的种子是完全无菌的，从而完成本发明。

因此，本发明提供了一种猕猴桃种子的无菌采集方法，所述方法包括以下步骤：

（1）取材，选取健康、成熟的猕猴桃果实；

（2）灭菌，将手术刀、镊子、滤纸用报纸包裹起来，将装有蒸馏水的容器用牛皮纸密封瓶口，向带盖的实验瓶内放入磁力搅拌子，再将上述物品置于高压灭菌锅内灭菌，然后放入超净工作台，紫外灯照射40min；

（3）采集，将猕猴桃果实置于灭菌的滤纸上，用镊子和手术刀剥皮，将剥完皮的果肉置于另一张灭菌的滤纸上，用镊子挤压，然后投入实验瓶，倒入灭过菌的蒸馏水至实验瓶体积的三分之二，拧紧瓶盖，置于磁力搅拌器上搅拌2-3min，静置，取沉在瓶底的饱满健康种子，再用无菌水冲洗2-3次，获得干净的猕猴桃种子。

在优选的实施方式中，所述装有蒸馏水的容器可以为三角瓶，所述带盖的实验瓶为果酱瓶。

在具体实施方式中，步骤（2）中在高压灭菌内灭菌的条件为在121℃下，在0.1MPa压强下灭菌20min。

在优选的实施方式中，在步骤（3）中，使用镊子和手术刀之前，在酒精灯上进行灼烧。优选地，磁力搅拌器的转速为1500-2400 r/min。