[发明专利]一种发酵产Rakicidin B1的海洋小单孢菌株及其应用

说明书

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种发酵产Rakicidin B1的海洋小单孢菌株及其应用。本发明通过对现有产Rakicidins化合物的海洋小单孢菌株FIM02523进行诱变育种，得到一株高产Rakicidin B1的突变菌株海洋小单孢菌株FIM‑R160609，该菌株能够有效提高发酵液中Rakicidin B1的效价，在20‑1000L发酵罐的发酵实验中，海洋小单孢菌FIM‑R160609发酵产生Rakicidin B1的效价高达600mg/L左右，且发酵液组分比例B1：B≥97：3，不仅极大的提高了目标产物Rakicidin B1的发酵产量，而且有效降低了其他Rakicidins副产物的产率，有利于后续Rakicidin B1的提取纯化工作，可以满足工业化需求。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种发酵产Rakicidin B1 的海洋小单孢菌株及其应用。

背景技术

Rakicidins类化合物为海洋小单孢菌的发酵产物，目前已分离的 Rakicidins类化合物主要含有Rakicidin A、Rakicidin A1、Rakicidin B1及 Rakicidin B，其化学结构及组分如下：

Rakicidins类化合物因为其15元环脂肽结构中含1个稀有罕见的4-氨 基-2,4-戊二烯酸辛酰胺并有抗肿瘤细胞活性而受到关注。Yamazaki(2007) 研究发现，Rakicidin A具有卓越的乏氧选择性抗肿瘤细胞活性，在乏氧条 件下抗结肠癌HCT-8细胞活性是常氧条件下的17.5倍；Takeuchi(2011) 也首次报道了Rakicidin A在乏氧条件下能够诱导髓性慢性白血病干细胞的 凋亡。虽然该Rakicidin A的抗乏氧肿瘤细胞及抗CSC的作用机制尚不清楚， 但Rakicidin A已被许多同行认为是一个极富开发前景的抗乏氧肿瘤细胞及 抗CSC药物。

福建省微生物研究所于2006年首次在国内报道了从微生物代谢产物中 分离到化合物Rakicidin A、B和B1(详见中国专利CN 105709205A和CN 105753936A)，并对RakicidinB(FW523-3)的有关生物学活性进行了初步 研究，更是首次发现Rakicidins A和B化合物具有抗临床致病艰难梭菌等厌 氧菌、抗耐万古霉素肠球菌的活性，具有较大的研发价值。

但是，现有研究中关于Rakicidins类化合物的发酵生产工艺研究及报道 均较少，而Rakicidin B1化合物更是本课题组首先发现(记载于中国专利 CN105753936A)。Kimberly D.Mcbrien等虽然报道了Rakicidins类化合物的 发酵及分离纯化工艺，但其仅限于摇瓶工艺阶段，并未发展到适合的工业 化生产，而且其整体的发酵周期较长，并且其发酵液中的主要组分多为 Rakicidin A，Rakicidin B的含量比较低。福建省微生物研究所也于2006年报 道了一种从海洋青铜小单孢菌FIM 02-523的发酵液中提取到Rakicidins类化 合物的方法，所提取的Rakicidins类化合物包括Rakicidin A和Rakicidin B。但 是所述的方法也仅是限于摇瓶的基本发酵，不仅发酵水平低下，而且难以 应用于大规模发酵生产。

中国专利CN105779348A公开了一种Rakicidins类化合物的发酵方法，该 方法中，Rakicidins类化合物的最高总发酵效价为600mg/L左右，但为多组 分发酵，发酵液组分中B1：B的比例仅约等于1：4，Rakicidins B1化合物的 收率极低，难于实现工业化生产。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种发酵产Rakicidin B1 的海洋小单孢菌株，以解决现有技术中Rakicidin B1化合物的发酵产量较 低的问题。

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种利用上述菌株发酵 生产Rakicidin B1化合物的方法。