[发明专利]基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp‑PLA2的试剂盒及其制备方法，其中所述试剂盒包括反应液和胶乳抗体试剂，所述胶乳抗体试剂包括至少两种通过单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳抗体。所述制备方法为：筛选出特异性较强的Lp‑PLA2单抗，将多种单抗混合代替多抗进行胶乳偶联，得到胶乳抗体，再配制反应液，最后将胶乳抗体和反应液组成试剂盒，用于测定Lp‑PLA2的含量。通过本发明所述制备方法制备出的试剂盒，可以同时提高胶乳增强免疫比浊法测定Lp‑PLA2时的灵敏度和特异性，使得试剂盒的线性范围更宽，准确性更高，其具有极高的经济价值和广阔的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂制备领域，尤其涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法。

背景技术

心脑血管疾病是心脏血管和脑血管的疾病统称，心脑血管疾病具有“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高，并发症多”即“四高一多”的特点。目前，国内外指南均建议采用传统危险因素为基础的模型预测动脉粥样硬化性心血管疾病的短期和长期风险。但是，仅采用传统危险因素仍存在不足。因此，生物标志物被认为是传统危险评估的重要补充手段。

血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associatedphospholipase A2，简称Lp-PLA2)是新近出现的一种具有强烈促炎症作用的生物学标记物，可作为反映动脉粥样硬化斑块炎症及血栓形成事件的高度准确的独立风险因子，同时还可作为一种急性动脉粥样硬化性血栓复发事件高风险患者的准确风险评估标志物。目前，已上市的Lp-PLA2测定试剂盒按检测方法分类，主要是酶联免疫法、酶法、免疫荧光层析法和胶乳免疫比浊法。上诉检测方法中，酶联免疫法的操作繁琐，反应时间长(大于1.5小时)；酶法的灵敏度和特异性不高；免疫荧光层析法的精密度较差(CV>10％)，无法满足医院的检测精密度高、自动化程度高、TAT时间短等需求。

而胶乳增强免疫比浊法可以应用于全自动生化分析仪，具有自动化程度高、操作简便、检测时间短等优点。但是，为了提升灵敏度，胶乳增强免疫比浊法一般采用多抗进行标记，特异性不强，也即检测结果的准确性不高，严重阻碍了该方法的推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法，旨在解决现有技术中采用胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2时特异性较差和灵敏度不高的问题。

本发明的技术方案包括：

一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒，包括：反应液和胶乳抗体试剂；其中，所述反应液包括缓冲液、无机盐、增浊剂和防腐剂中的一种或几种；所述胶乳抗体试剂包括至少两种通过单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳抗体。

所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒，其中，在反应液中，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的任一种；所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸钠和/或硫酸镁中的一种或几种；所述增浊剂包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和/或聚乙二醇8000中的一种或几种；所述防腐剂包括Proclin300或叠氮钠中的任一种。

所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒，其中，所述胶乳微球的粒径范围为50-300nm。

一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其中，包括以下步骤：

A、量取固含量为10％的胶乳微球，加至缓冲液中，离心，去上清，用缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬，加入碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，活化；再次离心，去上清，用缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬，制得活化后的胶乳微球；

B、取至少两种单抗，并进行混合，制得含有多种单抗的抗体；