[发明专利]一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂和应用

说明书

本发明公开了一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂和应用，该菌株已经于2017年9月18日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.14641。以甲基营养型芽孢杆菌B18为菌种，经种子培养、发酵培养可制备得到液体制剂。本发明生防菌甲基营养型芽孢杆菌B18菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对防治杜仲猝倒病和杜仲促生具有显著的效果，不仅能避免化学药物所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂的制备和在杜仲猝倒病、促生上的应用。

背景技术

杜仲，属于杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，该科仅有1属1种植物，是我国仅存的第三纪孑遗植物，属国家二级保护名贵经济树种，还是我国特产树种和著名药材。杜仲有近千年的栽培历史，实用型极强，在我国亚热带至温带的27个省均可种植，主要产于四川、云南、贵州、湖南、湖北、陕西、江苏及浙江等省。杜仲被列为贵州地道中药材GAP基地示范品种之一。它全身都是宝，用途广泛，具有极大的药用价值和经济价值。杜仲被成为神奇之树，其叶、雄花、果实和树皮都含有许多人体不可缺少的活性物质，这些活性物质具有十分独特的医疗保健功能，在促进体内胶原蛋白的合成、抗衰老、降血压、抗疲劳、人体免疫调节、预防细胞癌变、降低血脂和胆固醇、治疗心脑血管疾病，补肝肾等方面有独特的功效，并且无毒副作用树皮可以入药，有滋补肝肾、强健筋骨、治疗腰膝痛和高血压等功效。树皮、叶和果实还能提取杜仲胶(又名硬橡胶)，可代替橡胶用，是世界上十分珍贵的优质天然橡胶资源。还可以加工成各种优质饮料。另外，杜仲的木材纹理直行、结构细致，不翘不裂，是制造家具和其他木制品的优质材料。目前国内外市场需求量大，皮、叶价格逐渐上涨。

猝倒病常在杜仲苗期发生，对其生长危害极大。在低温、高温、土壤粘重和排水不良的苗圃地或阴雨天易发病。病株靠近地面的茎干皱缩、变褐、腐烂以致倒伏而死。受害苗木茎的基部，根部皮层以及须根腐烂枯萎而死亡。种子感病后胚芽腐烂，感病幼苗苗尖腐烂。有关该病的研究很少，且防治上通常采用物轮作、科学管理、福尔马林、代森锌等进行控制，化学农药对环境污染极大，对人畜不安全。因此，环保型生物制剂(生物农药和生物肥料)越来越受到人们的青睐，是未来农林业可持续发展的重要组成部分。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术在防治杜仲猝倒病中的缺陷，提供了甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂在防治杜仲猝倒病中的应用。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)B18菌株于2016年11月20日采用平板稀释涂布法分离于四川大邑仰天窝药场健康杜仲树皮，该菌对花椒膏药病菌抑菌率达到99％以上，已经于2017年9月18日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.14641。

本发明甲基营养型芽孢杆菌B18在NA平板培养基上培养了2d的单菌落呈白色，圆形，边缘不整齐，表面干燥，有褶皱，无粘性，不透明。

本发明甲基营养型芽孢杆菌B18的16S rDNA的序列为：SEQ ID NO:1。

本发明以甲基营养型芽孢杆菌为活性成分的液体制剂，由甲基营养型芽孢杆菌B18为菌种，经种子培养、发酵培养得到液体制剂。

本发明所述的以甲基营养型芽孢杆菌B18为菌种的液体制剂中含活芽孢数不低于1×10⁸cfu/g。

进一步，本发明所述的以甲基营养型芽孢杆菌B18为菌种的液体制剂通过以下方法制备：

1)一级斜面种子：制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种甲基营养型芽孢杆菌后，培养制成一级种子；