[发明专利]建立含外源染色体的胚胎干细胞的方法

权利要求书

1.一种体外建立含外源染色体的胚胎干细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(a) 提供一供体细胞，将mCherry报告基因插入到所述供体细胞的各个染色体中，从而获得染色体中整合有mCherry报告基因的第一细胞系；

(b) 分离所述第一细胞系的各个染色体，从而获得单独的染色体；

(c) 将步骤(b)获得的单独的染色体注射到非人哺乳动物的受精卵中，从而获得包含外源染色体的受精卵；

(d) 将步骤(c)获得的受精卵体外培育形成囊胚，检测所述囊胚的mCherry荧光表达情况，从而获得表达mCherry荧光的囊胚；和

(e) 利用所述的表达mCherry荧光的囊胚，建立胚胎干细胞系，从而获得含外源染色体的胚胎干细胞；

所述的外源染色体是人14号染色体；

所述非人哺乳动物是小鼠；

所述的方法是非诊断和非治疗性的。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的供体细胞和受精卵来源于不同种类的动物。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的供体细胞来源于人或非人哺乳动物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的mCherry报告基因为CAG-mCherry基因。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，通过基因编辑技术将mCherry报告基因插入到所述供体细胞的各个染色体中。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，先将第一细胞系阻滞在M期，再分离所述第一细胞系的各个染色体。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，通过Democolcine将细胞系阻滞在M期。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述的单独的染色体的完整度≥90%。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的单独的染色体的完整度≥95%。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的单独的染色体的完整度≥99%。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的单独的染色体的完整度为99.9%或100%。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(e)中，获得的含外源染色体的胚胎干细胞的染色体的完整度≥90%。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，获得的含外源染色体的胚胎干细胞的染色体的完整度≥95%。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，获得的含外源染色体的胚胎干细胞的染色体的完整度≥99%。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，获得的含外源染色体的胚胎干细胞的染色体的完整度为99.9%或100%。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中，每个受精卵注射一条单独的染色体。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(e)之后，所述方法还包括步骤：

(f)对获得的胚胎干细胞中含有的染色体的种类和完整程度进行鉴定，从而获得包含完整的特定外源染色体的胚胎干细胞。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：

(g) 利用所述的含外源染色体的胚胎干细胞，制备含外源染色体的嵌合动物。

19.一种细胞的用途，其特征在于，所述的细胞用于制备人源化抗体；

所述细胞是用权利要求1所述的方法制备的含外源染色体的胚胎干细胞。