[发明专利]一种靶向CD19的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种靶向CD19的单链抗体，其特征在于，所述靶向CD19的单链抗体包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD19的单链抗体为人源化单链抗体。

2.如权利要求1所述的靶向CD19的单链抗体，其特征在于，所述靶向CD19的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

3.一种靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括靶向CD19的嵌合抗原受体CAR-CD19，所述CAR-CD19包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD19的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向CD19的单链抗体包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。

4.如权利要求3所述的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CAR-CD19的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

5.一种重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体包括如权利要求3或4任一项所述的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞的CAR-CD19的编码基因序列。

6.如权利要求5所述的重组病毒载体，其特征在于，所述CAR-CD19的编码基因序列包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求5或6任一项所述的重组病毒载体。

8.一种靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，包括：

(1)提供靶向CD19的嵌合抗原受体CAR-CD19的编码基因，包括从5’端到3’端顺次连接的信号肽的编码基因、靶向CD19的单链抗体的编码基因、CD8α铰链区的编码基因、CD8跨膜区的编码基因、4-1BB信号区的编码基因和CD3ζ信号区的编码基因；所述靶向CD19的单链抗体为人源化单链抗体，所述靶向CD19的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

(2)将所述CAR-CD19的基因序列插入到pWPXLD载体中，得到pWPXLD-CAR-CD19重组质粒；

(3)将所述pWPXLD-CAR-CD19重组质粒与包膜质粒、包装质粒共转染宿主细胞，得到重组慢病毒；

(4)将所述重组慢病毒转染CD3阳性T淋巴细胞，获得靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞。

9.如权利要求8所述的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，所述包膜质粒为PMD2G，所述包装质粒为psPAX2，所述宿主细胞为HEK293T细胞。

10.一种如权利要求1-2任一项所述的靶向CD317的单链抗体、如权利要求3-4任一项所述的或如权利要求8-9任一项所述的制备方法制得的靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞、或如权利要求5-6任一项所述的重组病毒载体或如权利要求7所述的宿主细胞在制备预防、诊断和治疗恶性肿瘤药物中的应用。