[发明专利]一种靶向EGFR的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向EGFR的单链抗体，所述靶向EGFR的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向EGFR的单链抗体为人源化单链抗体，本发明还提供了一种包括所述靶向EGFR的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向EGFR的嵌合抗原受体可以专一性的靶向EGFR，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，同时人源化单链抗体制得的靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞更好的维持细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明还提供了一种靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向EGFR的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

人上皮生长因子受体(EGFR)是人上皮生长因子的主要受体。在激活后，EGFR会发生同源二聚，或与其他人上皮生长因子受体家族的成员发生异源二聚，从而诱导EGFR细胞内结构的自磷酸化，并激活下游通路例如丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路等，并介导细胞扩增。研究表明EGFR是一个在肺癌等多种实体瘤细胞中表达或异常表达，而在普通细胞中表达很微弱的细胞表面抗原。EGFR与肿瘤细胞的增殖、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。在癌症中，变异的EGFR得到持续性的激活，从而引起细胞无节制的扩增并最终导致癌症。因此，EGFR是一个癌症特异性靶点。

免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势弥补了传统疗法的弊端，在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)为当前过继性细胞回输治疗技术最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到清除恶性肿瘤细胞的目的而受到广泛的关注和研究。目前还未有靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞的制备和研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向EGFR的单链抗体，以及包括所述靶向E GFR的单链抗体的靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向EGFR的嵌合抗原受体可以专一性的靶向EGFR，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，同时人源化单链抗体制得的靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞能够更好的维持嵌合抗原受体T细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明还提供了一种靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向EGFR的单链抗体，所述靶向EGFR的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向EGFR的单链抗体为人源化单链抗体。

可选的，所述靶向EGFR的单链抗体编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可选的，所述靶向EGFR的单链抗体编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQ ID NO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQ ID NO:1。

本发明第一方面提供的所述靶向EGFR的单链抗体能够与EGFR蛋白发生特异性结合，对肿瘤细胞特别是表达EGFR的实体瘤细胞具有较强的亲和活性。

第二方面，本发明提供了一种靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向E GFR的嵌合抗原受体CAR-EGFR，所述CAR-EGFR包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向EGFR的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向EGFR的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向EGFR的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。