[发明专利]一种三叶青多糖的制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及了中草药三叶青多糖的制备及应用。以三叶青藤叶为原料，按照如下步骤依次实施：（1）热水浸提；抽滤收集滤液；真空浓缩；浓缩液加入乙醇；收集沉淀，即三叶青粗多糖。（2）将粗多糖溶于水，加入Sevag试剂；搅拌后离心除蛋白层和有机层，重复此步操作多次至不出现蛋白为止；（3）将除蛋白后的多糖溶于去离子水中，通过DEAE‑52离子交换层析和Sephadex G‑100葡聚糖凝胶层析得到三叶青多糖单一组分。本发明所涉及的三叶青多糖，可显著降低机体血糖血脂，改善机体内抗氧化酶酶活力水平，并对胰岛具有一定修复作用，具有很好的药用价值和市场价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种三叶青多糖的制备及其应用。

背景技术

三叶青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg）正名三叶崖爬藤，又名金线吊葫芦、蛇附子，生长于阴湿山坡、山谷等地带，主要分布在我国东南。西南地带。三叶青全草均可入药，是我国著名的中草药之一，具有显著的药用价值，如治疗病毒性脑膜炎、支气管炎、小儿高热惊厥、预防以及治疗癌症等。

糖尿病分为一型糖尿病和二型糖尿病，其中一型糖尿病是指胰岛素相对或绝对分泌不足，必须依赖胰岛素维系生命，二型糖尿病是指胰岛素抵抗或不敏感，患者具有典型的“三多一少”症状，即多食多饮多尿，体重减轻。随着人民生活水平日益增长，我国患糖尿病的人数与日俱增。据统计，目前我国糖尿病病人人数高达9000多万人，位居世界第一，二型糖尿病患者占据糖尿病患病人数的80%以上，且50%以上二型糖尿病患者具有一种或多种糖尿病并发症。糖尿病并发症包括高血压、高血脂、心脑血管疾病等，严重损害人民的身体健康，因此防治糖尿病刻不容缓。

发明内容

本发明的目的在于提供一种三叶青多糖的制备及其应用。

为解决上述技术问题，本发明可以通过以下步骤实现。

所述三叶青多糖的制备，包括以下步骤：

（1）三叶青粗多糖的提取：

干燥三叶青经粉碎后用去离子水80℃煮提 3 小时；抽滤得滤液，滤液经过80度水浴浓缩至原体积的四分之一，加入5倍体积的无水乙醇，沉淀静止过夜；5000转/分离心10分钟收集沉淀，经冷冻干燥后得粗多糖；

（2）Savag法除蛋白。

A1：向10wt%三叶青粗多糖水溶液中加入 Sevag 试剂充分搅拌1~2小时，；

B1：然后3500～4500 转/分离心10～25分钟，去除蛋白层和氯仿层，水层重复操作至不再出现蛋白层为止，所得水溶液经透析和冷冻干燥得到脱蛋白三叶青精多糖。

（3）三叶青精多糖的分级：

将5wt%脱蛋白三叶青多糖经DEAE- 纤维素离子交换层析柱分级；3倍柱体积的不同浓度氯化钠溶液洗脱，收集0.3M氯化钠洗脱液组分，经去离子水透析、冷冻干燥得到多糖级分。

步骤（2）中，Sevag 试剂包括正丁醇及氯仿；其中 ：正丁醇与氯仿的体积比为：1 ：4；

本发明方法制得的三叶青多糖组分经过Sephadex G-100凝胶洗脱鉴定为单一组分，其中单糖组成以及摩尔比率分别为Rha：Ara：Man：Glc：:Gal = 006：0.13：0.38：0.09：0.31。分子量为9×10⁴ ～ 10.0×10⁴Da。

本发明的显著优点在于：

通过传统水提醇沉方式提取多糖，提取条件简单，提取成本低廉，其次通过两步纯化得到单一组分的多糖，便与后续进行降血糖活性的相关应用。

附图说明