[发明专利]一种罗非鱼罗湖病毒的恒温快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种罗非鱼罗湖病毒的恒温快速检测试剂盒，其特征在于包括检测罗湖病毒病原的恒温荧光检测引物组，由一对外引物、一对内引物和一对环引物组成，

一对外引物的序列为：

F3：GTACCAGCAGATTTGTAAGGT，

B3：CTATCACGTGCGTACTCG；

一对内引物的序列为：

FIP：CCACTCAATACGAGGCTTCGGCATCCTACGATGCTGAGC，

BIP：CCAGACTTGCGGACATATCCAACAGGCGAGGAACTTTGAG；

一对环引物的序列为：

LF：TGGTAGTTCCAATAGCCGTTC，

LB：AGGCAATATGGATTCTTCGAGT。

2.如权利要求1所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中引物组的外引物、内引物和环引物的摩尔比为1～2：4～8：2～4。

3.如权利要求2所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中引物组的外引物、内引物和环引物的摩尔比为1：4：2。

4.如权利要求1所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，还包括DNA聚合酶，反转录酶，2×反应缓冲液，荧光染料，密封液，标准阳性模板和阴性对照。

5.如权利要求4所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，所述的2×反应缓冲液由buffer缓冲液、甜菜碱和dNTPs组成，buffer缓冲液、甜菜碱与dNTPs的体积比为10：8：7。

6.如权利要求4所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，所述反转录酶为AMV反转录酶，所述荧光染料为0.02mM SYTO-9，所述密封液为矿物油。

7.如权利要求4所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，所述标准阳性模板为含有罗非鱼罗湖病毒病原检测靶标基因的质粒DNA，所述阴性对照为灭菌超纯水。

8.如权利要求1所述的恒温快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系的成分组成为：引物F3、B3、FIP、BIP、LF、LB在反应体系中的终浓度分别为0.2μM、0.2μM、0.8μM、0.8μM、0.4μM、0.4μM，2×反应液12.5μL，DNA聚合酶8U，反转录酶2U，0.02mM SYTO-9 0.5μL，待检样品2μL，加灭菌超纯水至25μL；反应体系的反应条件为63℃反应45～60min，并在80℃持续2min。