[发明专利]七叶一枝花种子超低温保存方法

权利要求书

1.一种七叶一枝花种子超低温保存方法，包括步骤以下：

(1)采摘七叶一枝花种子，喷洒40ppm赤霉素+500倍多菌灵+1000倍甲基托布津溶液5～30kg/100kg七叶一枝花种子，在空气湿度30～55％、常温放置25～50天，用水洗净，用营养液温育20～50min后，取出温育过的七叶一枝花种子；

(2)温育过的七叶一枝花种子放入冻存管中，再加入抗冻液进行室温温育15～35min，再将其放入梯度降温盒中；

(3)将带有七叶一枝花种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在‐35℃～‐60℃，降温速度为‐1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用；

(4)经低温保存5年后，再将降温盒从液氮中取，缓慢解冻，洗净后用于种子发芽。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)中所述营养液指MS液体培养液，还包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜。

3.根据权利要求1的方法，其中所述营养液优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％甘油或异丙醇，可以重复使用。

5.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述抗冻液是指MS液体培养液，还包含有2.5～3mol/L甘油、1.5～2mol/L二甲基亚砜和0.4～0.8mol/L蔗糖。

6.根据权利要求5的方法，其中所述抗冻液优选10.50～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。

7.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。

8.根据权利要求1的方法，其中所述冻存管中七叶一枝花种子处理为再用自来水或者蒸馏水洗涤3～5次，清洗后用100ppm赤霉素+500倍多菌灵+1000倍甲基托布津溶液恒温浸泡8～15h，溶液温度保持在25～30℃，沥干水分，拌入5～10倍量种子的河砂，河砂与种子混合均匀后再放入搅拌机中打磨20～40min，再直播到苗床上进行育苗。