[发明专利]一种用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法

说明书

本发明公开一种用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中的甘油三酯含量的方法，该方法是通过监测牛PPARγ基因的表达量，根据牛PPARγ基因表达量与肌内脂肪中甘油三酯含量成正相关的特征，利用荧光定量实时PCR技术牛监测PPARγ基因的表达量，从而实现对牛肉肌内脂肪中甘油三酯含量的检测。利用本发明的方法来评定牛肌内脂肪中的甘油三酯，不仅不影响牛的正常生长，而且快速准确，操作方便，养殖者可以根据检测结果针对性的对饲料配方、环境因素或管理方法进行改善，从而实现对牛肉品质的有效控制。

技术领域：

本发明属于分子营养学技术领域，具体是一种用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法。

背景技术：

牛肉具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等特点，营养丰富，一直是世界肉业发达国家、肉类消费的首选，而我国的牛肉消费量也在逐年上升。影响牛肉品质的一个核心因素就是肌内脂肪，肌内脂肪的主要成分为甘油三酯，为保障牛肉的适口性，牛肉的肌内脂肪一般要求不低于3％，饲料的配方、环境因子以及管理方法都会对牛的肌内脂肪沉积产生影响。如何能够在养牛生产中实现对牛肉内甘油三酯的动态监测，从而及时的调整饲料配方、环境因素和管理方法被视为现代养牛业中急需解决的一种技术。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferations actiratedreceptor γ,PPARγ)基因属于核受体超家族成员基因之一，在脂肪沉积和脂肪细胞分化中行使着重要的作用。众多不同调控信号通路的研究结果表明：PPARγ基因在成年机体组织中广泛表达，但主要在脂肪组织中表达，PPARγ基因在诱导脂肪细胞分化的同时能够显著提高相关脂肪因子的表达量，如：LPL、PLIN1、GATA1、CEBPA、FABPA、FAS等等，因此，PPARγ基因在脂肪细胞分化过程中的表达对于启动和维持脂肪沉积起着重要作用。鉴于此，提供一种用PPARγ基因来监测和评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法。

发明内容：

本发明的目的旨在提供一种快速准确、操作方便用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

本发明的方法是通过监测牛PPARγ基因的表达量，根据牛PPARγ基因的表达量与肌内脂肪中甘油三酯含量成正相关的特征，通过荧光定量实时PCR技术度量牛肉中甘油三酯的含量，从而实现牛肉肌内脂肪中甘油三酯的检测。

具体包括如下步骤：

1)从被检测的牛肉组织中提取总RNA，再通过反转录反应制备cDNA样品；反转录反应按照TaKaRa反转录试剂盒标准流程进行；

2)将制备的cDNA样品进行荧光定量实时PCR检测，反应条件采用两步法PCR扩增标准程序；

反应体系为：SYBR 10ul，Dye0.4ul，上下游引物各0.25ul，cDNA模版1ul，ddH2O8.1ul，总体积为20；

反应条件采用两步法PCR扩增标准程序：预变性95℃4min，95℃ 5s，61℃ 15s，72℃ 30s，共35个循环；

采用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，其退火温度为61℃，内参基因与目的基因的扩增程序一致。

3)在ABI7500定量PCR仪上进行检测，荧光信号在每个循环结束时检测，每个样品3个重复，得到牛PPARγ基因的原始表达量；

4)将牛PPARγ基因的原始表达量经反正弦转换后，采用Statistics软件对实验数据和其他数据进行t检验，通过数据分析即检测到牛肉肌内脂肪中甘油三酯的含量。

上述定量PCR引物序列为：CCTGTTCCGTGCTGTGAT(上游引物)；AAAGGCATGGGAGTGGTC(下游序列)。