[发明专利]一种循环肿瘤细胞分离芯片及其检测方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞分离芯片，包括基底和上盖，所述基底和上盖密封；其特征在于，基底包括：加载室、过渡件、过滤室和废物室；所述上盖对应加载室的区域设置进样孔；加载室内设置一挡片，所述挡片对应处设置过渡件；所述过渡件结构靠近挡片处为从低到高的斜面；所述过滤室上端为细胞尺寸选择膜，下端的空间通过通道与废物室联通，所述过渡件的高度大于等于细胞尺寸选择膜的位置；在所述芯片的中心设置离心孔；在使用分离芯片时，通过进样孔给加载室进样，将芯片安装在离心设备上，当芯片旋转时，进样液体快速径向向外运动，通过过渡件泵送过滤室上，大于细胞尺寸选择膜孔径的细胞被捕获，小于细胞尺寸选择膜孔径的细胞转移到过滤室流入废物室。

2.根据权利要求1所述的一种循环肿瘤细胞分离芯片，其特征在于，所述基底和上盖通过双面压敏粘合带进行粘合。

3.根据权利要求1所述的一种循环肿瘤细胞分离芯片，其特征在于，所述过滤室与基底活动连接，过滤室背面依次设置通过密封O型圈和细胞尺寸选择膜压盖进行密封和加样。

4.根据权利要求1所述的一种循环肿瘤细胞分离芯片，其特征在于，所述细胞尺寸选择膜上随机分布有非均匀形式的孔，且细胞尺寸选择膜为可拆卸结构。

5.根据权利要求4所述的一种循环肿瘤细胞分离芯片，其特征在于，当处理含有脆弱细胞的进样液体时，跨越细胞尺寸选择膜的压降ΔP保持在阈值以下防止细胞损伤，通过使用以下方程来计算跨越细胞尺寸选择膜的压降：

其中μ是动态粘度的系数，L是细胞尺寸选择膜的厚度，d是细胞尺寸选择膜的孔径，Q是细胞尺寸选择膜的流量，N是细胞尺寸选择膜孔的数量。

6.根据权利要求1所述的一种循环肿瘤细胞分离芯片，其特征在于，所述基底和上盖外皆设置遮光贴，所述上盖内设置一个强力吸水膜。

7.基于权利要求1-6所述的一种循环肿瘤细胞分离芯片的检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤一：将进样液体在补充有胎牛血清和抗生素/抗真菌剂的培养基中，并在培养箱中和CO₂环境下培养；

步骤二：通过加载室将芯片的表面用牛血清白蛋白钝化；

步骤三：孵育后，芯片由离心设备置带动以一定转速进行旋转，使加载室中的胎牛血清溶液移到废物室中；

步骤四：洗涤缓冲液由进样孔加至加载室，保持步骤三芯片的转速，洗涤缓冲液通过细胞尺寸选择膜经过过滤室到废物室；

步骤五：保持离心装置按照步骤三的转速进行工作，将进样液体通过进样孔加至加载室；过滤室中的细胞进行分离，然后将加载室用洗涤缓冲液洗涤；

步骤六：分离结束后，将细胞尺寸选择膜取下安装与载玻片上进行染色处理，由荧光显微镜进行观察并记录数据。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，将所有细胞在补充有5％FBS胎牛血清1％抗生素/抗真菌剂的培养基中，并在设定为37℃的培养箱中和5％CO₂环境下培养，对于加标实验，细胞用荧光染料预标记。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，在进行细胞尺寸选择之前，将芯片的表面用牛血清白蛋白钝化，将1％牛血清白蛋白溶液加至样品由芯片上盖中的加样孔。

10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，保持过滤室充满液体。