[发明专利]蛹虫草菌种的优质保藏方法

说明书

本发明提供一种蛹虫草菌种的优质保藏方法，该方法是将蛹虫草菌种以菌悬液或菌丝块的形式，在4℃‑25℃条件下进行保藏，保藏期可达12个月以上。本发明通过优化蛹虫草菌种保藏形式、保护剂类型、温度范围及时间周期等保藏条件，提高了蛹虫草的菌种质量及稳定性，为菌种保藏及人工栽培等提供技术保障。

技术领域

本发明涉及微生物菌种保藏方法，具体地说，涉及蛹虫草菌种的优质保藏方法。

背景技术

虫草的应用最早起源中国，其作为珍贵中药材和食用真菌资源被广泛利用。蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北虫草、北冬虫夏草等，属于子囊菌门、肉座菌目、虫草菌科、虫草属真菌，是一种食药用虫草。蛹虫草无性型是蛹虫草拟青霉，无性型在单饱子菌株水平上，菌落特征、有性子实体形成能力、产孢结构等方面差异较大。蛹虫草寄生于鳞翅目等昆虫蛹体或幼虫且发育形成子实体。蛹虫草主要分布于辽宁、吉林、云南、新疆、内蒙古、广东、四川等地，但因其特殊的生长环境要求，造成野生蛹虫草的产量十分有限，严重制约虫草产业发展。蛹虫草富含虫草素、虫草酸及喷司他丁等具有抗癌、抗菌、抗疲劳及提高免疫等多种生物活性成分，其药用价值与冬虫夏草相似，有些成分甚至优于传统的冬虫夏草，因而已广泛作为冬虫夏草的替代品应用于药用及食用菌领域。随着现代人们生活水平的提高，对虫草产品的药用及保健等价值认识的不断深入，对蛹虫草资源及产品等需求也日益增加。

蛹虫草的生物学特性、人工培养技术等开发利用研究已经广泛开展。但是，由于过度人工采挖，导致蛹虫草野生资源严重匮乏；而在人工规模化生产过程中，也经常出现因菌种遗传背景不清而引起菌种退化和变异严重等现象，造成子实体畸形、产量减少及品质下降等问题，制约着虫草产业的发展与升级。微生物菌种保藏主要是通过延缓菌种的新陈代谢等，避免继代培养过程中的菌种变异和污染，甚至死亡等问题的发生，保障菌种具有正常及稳定的生长特性及活力。

目前蛹虫草菌种保藏中存在的主要问题是：保藏周期较短(3-6个月)，易污染(液体或石蜡油保藏出现易污染及菌种死亡现象)，菌种质量评估时间长(一般需通过子实体诱导形成加以评估，时间长达3-4个月)，菌种活力低(随着保藏时间延长，子实体形成能力降低甚至无法形成子实体，易出现退化型菌株)，诱导子实体稳定性差且品质降低(随着保藏时间，子实体易出现弯曲且细长，并无法形成子囊壳等)。因此，通过现代生物技术手段提高蛹虫草的菌种质量显得尤为重要。优质的保藏方法为蛹虫草的规模化生产提供技术保障，为虫草资源的持续开发利用等奠定良好的基础。

发明内容

本发明主要针对蛹虫草菌种保藏领域的技术空白，提供一种蛹虫草菌种的优质保藏方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的蛹虫草菌种的优质保藏方法，蛹虫草菌种是以菌悬液或菌丝块的形式，在4℃-25℃(优选4℃)条件下进行保藏。

前述的保藏方法，还包括向菌悬液或菌丝块中加入适量保护剂的步骤，其中所述保护剂为0.06g/mL蛋白胨溶液。

以菌丝块形式进行菌种保藏，具体如下：

方案I：将蛹虫草菌丝体接种至改良PDA培养基平板上，于23℃-25℃暗培养3-5天，然后50-100lx条件下光培养18-20天，取菌丝块置于无菌离心管中，盖紧盖子，于4℃-25℃保藏。

优选地，将蛹虫草菌丝体接种至改良PDA培养基平板上，于23℃暗培养3天，然后100lx条件下光培养20天，取菌丝块置于无菌离心管中，盖紧盖子，于4℃保藏。

方案II：将蛹虫草菌丝体接种至改良PDA培养基平板上，于23℃℃-25℃暗培养3-5天，然后50-100lx条件下光培养18-20天，取3mm×3mm菌丝块置于无菌离心管中，然后向离心管中加入0.06g/mL蛋白胨溶液200-500μL，盖紧盖子，于4℃-25℃保藏。