[发明专利]一种橡胶树叶的保存方法

说明书

本发明涉及一种橡胶树叶的保存方法，包括树叶采集、上石蜡、捆扎、密封、装箱。采用本方法可使橡胶树叶片样品保存5‑7天，且叶片细胞核较少降解，符合流式细胞术检测的样品标准，解决了距离较远的异地橡胶林中优良单株流式细胞术检测过程中面临的叶样运输和保存问题。可延长用于流式细胞术检测的橡胶树叶样的保存期限，有助于科研人员集中采集橡胶树叶片样品、集中检测，降低了采样过程中的往返成本，且本方法对设施要求简单，操作步骤简单易行，且操作成本较低。

技术领域

本发明属于农林经济作物的叶片样本保存技术，具体涉及一种橡胶树叶片样本保存方法，特别是一种适合长距离运输的用于流式细胞术检测的橡胶树叶样保存方法。

背景技术

橡胶树（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）是大戟科（Euphorbiaceae）重要的热带经济作物之一，也是目前唯一大规模产业化的天然橡胶来源，中国的海南、云南两省是国内天然橡胶的主要产地。由于天然橡胶具有合成橡胶所不能替代的独特物理性能，使其在工业和国防等领域有广泛需求，随着经济和社会的发展天然橡胶需求日益旺盛，但目前国内绝大多数天然橡胶原料依然需要进口，供应形势较为严峻。但由于橡胶树属于典型的热带作物，国内宜植土地有限，只能通过提高单位面积产量的方式来增加供给，而选育优良新品种则是提高橡胶树单位面积产量的关键。当前橡胶树新品种选育最为有效的方法之一是从已经投入生产的橡胶林中筛选优异单株，对优异单株进行鉴定后再进行繁殖和育种利用。

流式细胞术以橡胶树的叶片为材料，既可以快速测定橡胶树的基因组大小，又可以快速鉴定橡胶树的染色体倍性，是橡胶树优异单株筛选、鉴定和优良新品种选育的关键技术之一。流式细胞术检测需要依赖于大型设备流式细胞仪进行，该设备属于精密光学设备，体积较大，价格高昂，无法随身携带或频繁转运，对于异地的样本，只能将样本送至流式细胞仪所在地进行检测，且流式细胞术检测的样品必须是细胞核结构完整的活体样本。而需要进行流式细胞术筛选和鉴定的橡胶树优异单株一般都位于远离流式细胞仪所在地的村寨或农场已经投入生产的橡胶林中，往往交通不便，叶样采集工作一个往返往往需要3至5天，且橡胶树种植地气候炎热，若采用常规方式保存和运输用于流式细胞术检测的橡胶树叶片样本，往往叶样还在途中其细胞核已经降解，导致叶样损坏无法用于检测，这给橡胶树优异单株流式细胞术筛选、鉴定和优良新品种选育造成了阻碍。

采用目前已公开或报道的其他叶样保存方法均无法实现用于流式细胞术检测的橡胶树叶样3天以上的运输和保存，目前也尚未见到用于流式细胞术检测的橡胶树叶样较长期的保存方法，尤其是适合长距离运输的用于流式细胞术检测的橡胶树叶样较长期的保存方法。

发明内容

本发明主要解决的问题是公开一种适合长距离运输的用于流式细胞术检测的橡胶树叶样较长期的保存方法。

为解决本发明上述技术问题，所采用技术方案如下：

一种橡胶树叶样保存方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤（1）、树叶采集：采集橡胶树浅绿色嫩叶，保留小叶叶柄；

步骤（2）、上石蜡：采集后1-2 min内，用吸水纸擦除叶柄下端流出的胶乳，手握叶柄上端将叶柄下端1-1.5 mm处伸入融化的石蜡中蘸0.5-1 s，取出1-3 min待石蜡凝固；

步骤（3）、捆扎：取若干上石蜡后的叶片作为1捆，叶柄处用宽度1-1.5 cm的干燥棉纱布缠绕3-5圈，每捆叶片缠绕纱布后将叶柄部插入EP管中；

步骤（4）、密封：取带盖的离心管，在其底部垫上充分湿润但不滴水的棉纱布，将步骤（3）所述的EP管和树叶放入带盖的离心管中，拧紧离心管盖；