[发明专利]一种利用响应面法优化油橄榄叶总黄酮的提取方法

权利要求书

1.一种利用响应面法优化油橄榄叶总黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品溶液制备：

准确称取油橄榄叶粉末，加甲醇水浴热浸提，3000-5000转离心8-15min，收集上清液后定容；

(2)用AlCl₃显色法测定并计算总黄酮含量；

所述的AlCl₃显色法，包括以下步骤：取待测液2mL，加4mL AlCl₃(1％)试剂，30％甲醇定容至25mL，摇匀避光，静置10min，于415nm检测吸光值；以芦丁标准液浓度为x轴、吸光度为y轴，绘制标准曲线；所得回归方程为y＝0.0359x-0.0012，R²＝0.9993；

总黄酮含量(％)＝样品液中总黄酮质量浓度×样品液体积×稀释倍数/初始油橄榄叶质量/1000×100；

(3)实验设计和统计分析；

A、单因素试验；

以油橄榄叶总黄酮含量为指标，考察甲醇浓度(60、70、80、90、100％，固定料液比1:40，时间180min，温度70℃)、提取时间(60、120、180、240、300min，固定料液比1:40，甲醇浓度70％，温度70℃)、提取温度(60、70、80、90、100℃，固定料液比1:40，时间180min，甲醇浓度70％)、料液比(1:10、1:20、1:30、1:40，固定甲醇浓度70％，时间180min，温度70℃)4个因素对总黄酮含量的影响；

B、响应面优化试验方法；

在单因素试验结果的基础上，采用Design-Expert 8.0(RSM)软件设计试验条件，选用Box-Behnken(BB)模型，以油橄榄叶总黄酮含量为响应值y，甲醇浓度(A)、料液比(B)、提取温度(C)、提取时间(D)为自变量，设计4因素3水平响应面试验，建立多元二次回归方程：

Y＝3.10+0.34A+0.070B+0.063C-0.095D+0.035AB+0.018AC+0.19AD-0.050BC+0.095BD+0.25CD-0.58A²-0.35B²-0.46C²-0.31D²；

(4)数据处理

采用Microsoft Excel 2010、SPSS 17.0对实验数据进行统计分析处理；所有试验均重复三次。

2.如权利要求1所述的利用响应面法优化油橄榄叶总黄酮的提取方法，其特征在于，最佳提取工艺为：甲醇浓度82％、料液比1:29g/mL、提取温度90℃、提取时间106min。