[发明专利]一种树突状细胞诱导培养基及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种树突状细胞诱导培养基及其应用。所述培养基以培养基体积计，在RPMI‑1640培养基中添加以下成分：胎牛血清的体积分数为8％～12％、hrGM‑CSF 5～10ng/ml、IL‑4 5～10ng/ml、IL‑3 100～160ng/ml、SCF 60～120ng/ml、hrBDNF 60～100ng/ml、CYM‑5442 120～200ng/ml。该培养基以hrBDNF和CYM‑5442作为关键调控因子，使得人脐血单个核细胞诱导成为DC时间可缩短为10天左右，且所得的DC具有优秀的生物活性。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种树突状细胞诱导培养基及其应用。

背景技术

树突状细胞(Dendritic cell,DC)属于起源干细胞的白细胞范畴，是初始免疫反应中最重要的抗原提呈细胞，特异性激活T天然细胞。肿瘤患者树突状细胞的免疫功能不全，肿瘤细胞抗原加工机能下调、低表达或不表达共刺激分子，是使其产生免疫逃逸的主要原因。树突细胞治疗通过采用病人自体的单核细胞在体外培养诱导生成DC，然后负载相应的肿瘤抗原，制成负载肿瘤抗原的树突细胞，再将这些树突细胞注入体内后刺激体内的肿瘤杀伤性淋巴细胞增殖，发挥长期肿瘤监视作用和肿瘤杀伤作用，达到消灭肿瘤的目的。应用抗原提呈细胞－树突状细胞为中心的免疫治疗，是肿瘤生物学治疗的主要方向之一。

树突状细胞的获取是对其进行研究的必要前提，但是，树突状细胞及其前体在体内含量极少，而体外诱导外周血单个核细胞以得到足够数量的树突状细胞进行生物治疗，在标本来源上和技术上尚存在困难。

脐血则来源丰富，一直废弃不用。近年来的大量研究发现，每单位体积脐血中的造血干细胞比骨髓和外周血干细胞量更多、更原始。有研究报道，外周血、脐血单个核细胞与GM-CSF、IL-4、TNFα共培养后可分化为功能性的树突状细胞。但现有技术中DC体外促成熟的方案尚没有统一的标准，国内主要采用TNF-a因子，但该方法活化的DC成熟度低下，不能分泌促炎因子IL-12，致使培养得到的DC功能缺陷，且培养时间较长。很大程度上限制了DC疫苗的临床应用工作的开展。因此，有必要对现有DC细胞培养方案进行进一步完善，以有效提高DC疫苗在诱导抗炎或抗肿瘤免疫应答中的作用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种树突状细胞(Dendritic cell,DC)诱导培养基，以S1P1受体激动剂CYM-5442及人重组脑源性神经营养因子(hrBDNF)作为关键调控因子，并适应调整原有树突状细胞诱导培养基，可很好的应用于DC诱导成熟及临床应用。

本发明的第二目的在于提供一种所述的树突状细胞诱导培养基在诱导人脐血单个核细胞向DC分化中的应用，所述的树突状细胞诱导培养基能够诱导人脐血单个核细胞向DC分化成熟，不仅诱导培养时间更短，且所得到的DC能够分泌更多的促炎因子IL-12。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种树突状细胞诱导培养基，以培养基体积计，在RPMI-1640培养基中添加以下成分：

胎牛血清的体积分数为8％～12％、hrGM-CSF 5～10ng/ml、IL-45～10ng/ml、IL-3100～160ng/ml、SCF 60～120ng/ml、hrBDNF 60～100ng/ml、CYM-5442 120～200ng/ml。

脑源性神经营养因子BDNF(Brain derived neurotrophic factor)在炎症和过敏反应当中扮演着关键的角色。之前有研究表明，BDNF及NGF能够刺激DC在炎症反应中激活，并促进IL6或IL10的释放(Clinical and Experimental Allergy,37,1701–1708，2007，O.NogaM.Peiser et.al)；但BDNF在诱导DC分化成熟中的研究还很少。