[发明专利]一种硫酸软骨素D四糖的制备方法在审
| 申请号： | 201711216846.9 | 申请日： | 2017-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN108070627A | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 李燕妮 | 申请（专利权）人： | 滨州医学院 |
| 主分类号： | C12P19/04 | 分类号： | C12P19/04;C07H1/06;C07H11/00 |
| 代理公司： | 青岛发思特专利商标代理有限公司 37212 | 代理人： | 耿霞 |
| 地址： | 264003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 硫酸软骨素 四糖 制备 阴离子交换色谱 鲨鱼硫酸软骨素 凝胶色谱分离 生物化工技术 寡糖单体 确切结构 乙醇沉淀 酶降解 研究 | ||
1.一种硫酸软骨素D四糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)硫酸软骨素D的酶法降解：鲨鱼硫酸软骨素5g，按5％(W/V)的浓度溶于pH8.0缓冲溶液中，加入50IU硫酸软骨素AC酶，37℃搅拌酶解48h；反应结束后，加入5倍体积95％乙醇沉淀，冷冻干燥，得到硫酸软骨素寡糖混合物；
(2)硫酸软骨素D寡糖混合物的阴离子交换分离：将步骤(1)得到的样品用0.15mol/L的NaCl溶液溶解成0.1g/mL，色谱柱规格2.6×20cm，Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换填料，紫外检测波长232nm，进样量10ml，流动相0.15mol/L和1.2mol/L的NaCl溶液，流速1.33mL/min，梯度洗脱，收集所得到的不同组分；
(3)硫酸软骨素D寡糖的凝胶过滤脱盐：将步骤(2)收集到的组分进行G-25葡聚糖凝胶过滤脱盐，脱盐后浓缩冻干；
(4)硫酸软骨素D寡糖的凝胶过滤分离：将步骤(3)冻干的样品用纯化水溶解成0.1g/mL，色谱柱1.6×100cm，Bio-Gel P6聚丙烯酰胺凝胶填料，紫外检测波长232nm，流动相0.2mol/LNaCl溶液，流速0.4mL/min，进样量2ml，收集所得到的不同组分；
(5)硫酸软骨素D寡糖的凝胶过滤脱盐：将步骤(4)收集到的组分进行G-25葡聚糖凝胶过滤脱盐后浓缩冻干,即得硫酸软骨素D四糖。
2.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素D四糖的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，收集硫酸软骨素D寡糖混合物的阴离子交换分离的最后一个洗脱组分。
3.根据权利要求1或2所述的一种硫酸软骨素D四糖的制备方法，其特征在于：在步骤(4)中，收集硫酸软骨素D寡糖凝胶过滤分离后的最后一个洗脱组分。
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