[发明专利]一种胸腺来源的iNKT细胞定向诱导扩增的方法

权利要求书

1.一种胸腺来源的iNKT细胞定向诱导扩增的方法，其特征是，该方法由以下两个阶段组成：

第一阶段为体内刺激iNKT细胞增殖，使用特异性的刺激剂α-Galcer刺激小鼠体内iNKT细胞增殖；

第二阶段为体外定向诱导 iNKT细胞扩增，取经α-Galcer刺激的小鼠胸腺，制备单细胞悬液，并加入α-Galcer、诱导剂以辅助iNKT细胞扩增并引导其分化；

所述两个阶段包括以下步骤：

a、于6周龄DBA/1雄性小鼠尾根部皮下单次注射刺激剂α-Galcer，所述α-Galcer的用量为2μg/只；

b、8天后，将小鼠脱颈处死，取胸腺制备单细胞悬液，并进行细胞计数；

c、用含有α-Galcer、IL-2、IL-4、维生素C、β-巯基乙醇、青霉素、链霉素以及15vol%FBS的KBM-551完全培养基将细胞密度调整为2×10⁶个/ml，并置于37℃、5vol%的CO₂培养箱中培养；每4~5天为细胞换液及传代，第14天收获细胞；其中，所述培养基中α-Galcer的浓度为100ng/ml，IL-2的浓度为100IU/ml，IL-4的浓度为25IU/ml，维生素C的浓度为1μmol/ml，β-巯基乙醇的浓度为0.05mmol/ml，青霉素的浓度为100U/ml，链霉素的浓度为0.1mg/ml。