[发明专利]一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测领域，采用胶乳免疫比浊法，属于临床体外检测试剂领域。

背景技术

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是脂质运载蛋白的一种，最初是在激活中性粒细胞中被发现的一种小分子量分泌性蛋白。NGAL的分子量约为25kDa，共价结合于中性粒细胞明胶酶。NGAL在生理状态下是一种生长因子，主要参与早期肾脏上皮的发生和生长，在正常组织包括肾脏、肺、胃及结肠的上皮组织中表达量较低。在发生缺血性和毒性肾损伤过程中，肾小管上皮细胞中的NGAL显著增加，在开始的两个小时内，尿液和血液中NGAL水平显著增加，因此NGAL是早期急性肾损伤的敏感标志物，也是反映肾功能损伤的标志物，适用于慢性肾病(CKD)、糖尿病肾病、狼疮肾病、IgA肾小管间质性损伤和心肾综合征(CRS)等的检测。

NGAL的检测方法有酶联免疫分析法和胶体金比色法免疫浊比浊法。胶体金比色法有快速简便，易观察的特点，但只能进行定性或半定量检测，灵敏度低。酶免分析法操作简便，特异性强，但灵敏度较低、线性范围较窄。与其他方法相比，免疫比浊法操作简便、结果准确可靠、自动化程度高，且检测快速，具有较高的临床可用度。

常规的NGAL免疫比浊法检测试剂盒中抗体的免疫活性随着放置时间逐渐衰减，降低检测试剂盒的稳定性，限制了线性检测范围，制约了临床应用的推广，急需改进。

发明内容

针对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒应用中存在的问题，本发明对常规现有试剂进行了改进，加入了聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)和EDTA在试剂中，有效增强了抗体的免疫活性，从而提供一种稳定高效、保存时间长的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂，保证试剂能在2-8℃条件下稳定放置20个月，同时线性检测范围达到临床应用的要求。

本发明是通过以下措施实现的：

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，各组分原料含量如下：

试剂R1组成：40mmol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液，1mmol/L氯化钠，1.5mmol/L叠氮钠、0.1mmol/L聚乙二醇。

试剂R2组成：2％抗人NGAL抗体的致敏乳胶颗粒，1mmol/L氯化钠、1.5mmol/L叠氮钠、40mmol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液、20-40g/L牛血清白蛋白、0.1-1mmol/L EDTA。

本发明的有益效果：

本发明提供的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒抗体活性高，准确性好，线性范围较好，并且本试剂在2-8℃能稳定保存20个月。

附图说明

图1为实施例1准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性示意图；

图2为实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性示意图；

图3为实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性示意图；

图4为成品试剂盒与实施例1、2、3试剂放置在2～8℃条件下的稳定性曲线。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合具体的实施例进行说明。

实施例1

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，试剂组分组成如下：

试剂R2：

本实施例描述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，在使用时采用迪瑞CS-600B全自动生化分析仪进行测定，具体操作步骤如表1所示。

表1中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL检测试剂盒检测方法

计算方法：

样本浓度＝(样本ΔA/校准ΔA)×校准浓度

实施例2

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，试剂组分组成如下：

试剂R1：

试剂R2：

具体测试方法如同实施例1。

实施例3

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，试剂组分组成如下：

试剂R1：

试剂R2：

具体测试方法如同实施例1。

准确度相关性验证实验：