[发明专利]一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的粘质沙雷氏菌生防菌及其应用

说明书

本发明属微生物领域，具体涉及一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的粘质沙雷氏菌生防菌株及其应用。粘质沙雷氏菌生防菌株3J4SM已于2017年6月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC No.M 2017328。本发明的粘质沙雷氏菌生防菌株3J4SM用于抑制黄曲霉菌产生黄曲霉毒素，防治粮食作物的黄曲霉毒素污染。

技术领域

本发明属微生物领域，具体涉及一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的粘质沙雷氏菌生防菌株及其应用。

背景技术

黄曲霉菌是一种病原性真菌，能产生一类强致癌有剧毒的真菌毒素-黄曲霉毒素，包括B、G和M族，其中B1最普遍且毒性最强。其能广泛污染花生，玉米等粮食作物，严重威胁人及家畜的健康，并造成极大的经济损失。因此，加强黄曲霉及毒素污染的防控刻不容缓。

目前，在对黄曲霉菌的防治中，有物理、化学、生物三种防治方法。但化学防治不但成本高，且易污染环境，在防控病原菌的同时病原菌也易对化学药剂产生耐药性甚至抗药性。物理防治有费时费力、去毒率不高、易造成营养物质流失。而生物法具有安全、高效、持久的优点。因此，加强黄曲霉菌生物防控的研究对我国农业产业及经济效益具有重要的意义。现有研究中，暂未见粘质沙雷氏菌抑制黄曲霉的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的粘质沙雷氏菌生防菌株3J4SM及其应用。本发明中的粘质沙雷氏菌生防菌株3J4SM能显著抑制黄曲霉产毒，对不同品种来源的花生黄曲霉产毒也有极好的抑制效果。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

提供粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)生防菌株3J4SM，已于2017年6 月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC No.M 2017328，保藏地址：中国，武汉，武汉大学。

本发明将从湖北黄陂花生地里采集的土壤进行梯度稀释后取100μL于LB 固体培养基中涂平板进行培养，将长出的细菌用接种环挑出转接到新鲜的LB 固体培养基中进行平板划线，多次转接后挑取单菌落，通过在培养基中与黄曲霉共培养实验，即：花生离体接种黄曲霉进行共培养抑菌实验，测其产毒力，最终筛选出一株对黄曲霉产毒有显著作用的粘质沙雷氏菌生防菌株3J4SM，保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC No.M 2017328。利用16S rDNA特异性扩增技术结合形态特征、生理生化实验对其菌种鉴定，结果表明这是一株粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)，属于肠杆菌科，沙雷氏菌属。

表1：粘质沙雷氏菌3J4SM的主要生物学特性：

上述粘质沙雷氏菌3J4SM在抑制黄曲霉菌产生黄曲霉毒素中的应用。具体的应用方法为：将粘质沙雷氏菌3J4SM发酵液包覆在生物样品表面，防治生物样品的黄曲霉毒素污染。

按上述方案，所述的粘质沙雷氏菌3J4SM发酵液的终浓度为(1-9)×10⁷ CFU/mL。

按上述方案，所述粘质沙雷氏菌发酵液的制备方法为：粘质沙雷氏菌 3J4SM在LB平板中活化，在37℃培养箱中培养24h，用挑针挑取粘质沙雷氏菌的单菌落，转移至液体培养基中，振荡培养12h-24h，吸1％-3％培养液转接至新鲜的液体培养基中，振荡培养12h-24h，获得拮抗菌株粘质沙雷氏菌3J4SM 的发酵液。

本发明的有益效果：

本发明首次从花生地土壤中分离出一株对黄曲霉有较好防效的粘质沙雷氏菌菌株3J4SM。可用于抑制黄曲霉菌产生黄曲霉毒素，防治粮食作物的黄曲霉毒素污染。

具体实施方式