[发明专利]一种河豚毒素快速检测试纸条及其应用

说明书

本发明属于检测领域，具体涉及水产品虾蟹贝类等水产品中河豚毒素，适用于现场快速检测水产品中河豚毒素的样品前处理方法及其检测试剂盒。包括底板和底板的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次交错粘贴在底板；所述结合垫为经抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫；所述硝酸纤维素膜为预包被有TTX‑BSA检测抗原的检测线和山羊抗小鼠IgG的控制线的硝酸纤维素膜。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明中，样品前处理方法简便快捷，且对试纸条检测无干扰；文献中定义十个小鼠单位属于无毒水平，本发明可以达到肉眼可见的阴阳性区别，无需仪器检测，超过10个小鼠单位则会只出现控制线。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及水产品虾蟹贝类等水产品中河豚毒素，适用于现场快速检测水产品中河豚毒素快速检测试纸条和用其制备的试剂盒及其应用方法。

背景技术

河豚毒素存在于河豚鱼，织纹螺，扇蟹等水产品中，且传统的烹饪手段并不能降解河豚毒素，所以经常引起食物中毒事件；目前的检测手段包括仪器检测法，小鼠生物法等由于操作要求高并不适用于现场检测；所以开发一种适用于现场检测河豚毒素的试剂盒很有必要。

南昌大学发明了一种检测河豚毒素的胶体金免疫层析试纸,其特征是由载体板、硝酸纤维膜等组成(专利号CN201220077361.2)，可肉眼直接观察，但是检测限并不能达到水产品食用无毒水平，上海海洋大学发明了快速检测TTX(河豚毒素)的磁性免疫层析方法及检测试纸条的制备(专利号CN201110259579.X)，用磁信号仪定量检测河豚毒素能达到无毒水平，但是前处理方法不能满足快速和简便要求，不适合于现场检测要求。

发明内容

因此本发明的主要任务是开发出一种既能快速检测，又能在肉眼可见范围检测样品且能达到无毒水平。

本发明提供的河豚毒素快速检测试纸条，包括底板和底板的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次交错粘贴在底板；所述结合垫为经抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫；所述硝酸纤维素膜为预包被有TTX-BSA检测抗原的检测线和山羊抗小鼠IgG的控制线的硝酸纤维素膜。通过层析作用捕获免疫磁珠，依据样品层析后形成肉眼可见的1～2条显色条带，实现TTX的快速定性检测，其中无毒会有两个条带——检测线和控制线，有毒只有控制线。

其中，所述结合垫为经抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫的制备方法为将经抗TTX特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠与层析混合试剂混合后，均匀滴加在结合垫上干燥后制得；所述层析混合试剂由缓冲液A和缓冲液B等体积混合而成；所述缓冲液A为含有1-2％质量百分比PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、1-3％体积百分比吐温-20的0.005M(M为mol/L)硼酸缓冲溶液溶液；所述缓冲液B为含有有1-3％质量百分比的蔗糖、2-3％质量百分比BSA(牛血清蛋白)的0.005M硼酸硼砂缓冲液；所述磁珠与层析混合试剂混合的比例为60-180μg磁珠/1.5ml层析混合试剂。

上述试纸条还包括覆盖于样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫上层的透明塑料密封膜。

用上述河豚毒素快速检测试纸条制备的试剂盒，所述试剂盒还包括前处理剂；所述前处理剂为乙酸水溶液。实际上，试剂盒还可以包含说明书。

前处理试剂是针对试纸条检测开发的，能够解决试纸条的堵塞问题，从而提高检测灵敏度，使之达到无毒水平。

其中，上述乙酸水溶液的浓度的体积百分比为0.1％。

上述试剂盒的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品前处理：将样品和前处理剂混合后，反复吸打后，过膜0.22μm，调pH至7-8，过膜0.45μm得到测试液；