[发明专利]悬崖菊组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培养领域，尤其是涉及悬崖菊组织培养方法。

技术背景

悬崖菊是小菊的一种整枝形式。通常选用单瓣型、分枝多、枝条细软、开花繁密的小花品种，仿效山间野生小菊悬垂的自然姿态，整枝成下垂的悬崖状。栽培的关键是用竹架诱引主干向前及适时摘心。鉴赏的标准是花枝倒垂，主干在中线上，侧枝分布均匀，前窄后宽，花朵丰满，花期一致，并以长取胜。经人工艺术加工培养而成。一棵理想的悬崖菊应该是后宽前窄、呈等腰三角形且繁花密集向一面悬垂，长度要达3-4米。悬崖菊培植一般用扦插繁殖，栽培需一年时间方能体现悬崖菊的艺术魅力。花开时，鲜花缀满枝头，绿叶相间，远看形如蛟龙探海，近观似菊花瀑布。

发明内容

本发明的目的在于提供悬崖菊组织培养方法，本组织培养方法简单易行，悬崖菊组织诱导分化速度快，幼苗成活率较高，适合批量规模化培养。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：悬崖菊组织培养方法，包括：灭菌、诱导、增殖、移栽，具体包括以下步骤：

灭菌：取悬崖菊茎尖部位，用中性洗涤剂漂洗5-8分钟，再用流水冲洗30-45分钟，然后用75-95%酒精灭菌15-30秒，无菌水冲洗2-3遍，再用0.08-0.12%氯化汞溶液灭菌8-12分钟，无菌水冲洗2-3次，将悬崖菊茎尖切成小块；外植体灭菌可以灭杀悬崖菊茎尖部位携带的有害微生物，避免将有害微生物引入培养基质中造成污染，同时也可以避免微生物对培养基质的吸收利用，为茎尖细胞提供充足的营养成分供其分化；

诱导：选长13-15cm、宽13-15cｍ、厚0.4-0.7cm的海绵，将海绵用蒸馏水洗净并在体积分数为70-75％的酒精中浸泡20-30分钟，再用蒸馏水洗净备用；将一块海绵卷成中空的筒状体，底部固定一块圆形海绵，筒状体下部的海绵条插入装有MS培养基的罐头瓶中，培养基上放置0.3-0.5cm厚的粉状活性炭，以玻璃棒插8-10个小孔至基质底部，在每个小孔中垂直插入1-2片茎尖小块，在温度为22-24℃、光照时间为12-16小时、光照强度为2500-3000lx的培养条件下培养8-12天；活性炭有助于调节基质的容重、总孔隙度、通气孔隙、持水孔隙和气水比，同时活性炭还有助于降低茎尖的褐化率，在仅添加活性炭的MS培养基上较容易诱导愈伤组织，愈伤诱导率达99%以上，愈伤分化也较容易，愈伤分化率达98%以上，愈伤的生长情况好，质地疏松，活力旺盛；

增殖：取新鲜的MS培养基，遮光条件下依次加入蔗糖25-28g/L、蜂蜜20-22g/L、维生素B1 0.1-0.15g/L、（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇0.012-0.022 g/L、6-苄氨基腺嘌呤1.0-1.2mg/L、萘乙酸0.6-0.8mg/L、吲哚乙酸0.6-0.8mg/L、赤霉素0.03-0.05mg/L混合成培养液，将经诱导培养产生的健壮茎尖组织接入培养基中，在光照12-14小时、光照强度2500-3500lx、温度24-26℃，黑暗10-12小时、温度15-17℃的条件下培养15-18天；6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚乙酸能够作用于细胞，可刺激形成层细胞分裂，刺激根细胞生长，促进木质部、韧皮部细胞分化，促进逾伤组织发根、调节愈伤组织的形态建成，赤霉素有助于灭菌，可以防止愈伤组织腐烂，（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇能够与萘乙酸、吲哚乙酸发生络合反应，从而可以防止它们被光氧化分解为醛与吲哚而失去调节作用，在适当条件下，生长素可以经由解络合反应而转变为游离型，经运输转移到作用部位起作用；

移栽：将生根良好的增培苗移出培养室并置于室温下炼苗2-3天，然后向瓶内加少许水刚没过培养基，继续炼苗1-2天，小心取出小苗，冼净基部培养基，用多菌灵可湿性粉剂1500-2000倍液与0.022-0.025%高锰酸钾溶液浸泡消毒7-9分钟，取出在阴凉处晾10-15分钟后移栽到栽培基质中即可；通过炼苗并消毒后，幼苗可以迅速适应栽培基质的土质环境，可以缩短缓苗时间，增强对低温、大风等的抵抗能力，使悬崖菊迅速成活成长，植株健壮，长势旺盛，完成组培阶段。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

1）活性炭有助于调节基质的容重、总孔隙度、通气孔隙、持水孔隙和气水比，同时活性炭还有助于降低茎尖的褐化率，在仅添加活性炭的MS培养基上较容易诱导愈伤组织，愈伤诱导率达99%以上，愈伤分化也较容易，愈伤分化率达98%以上，愈伤的生长情况好，质地疏松，活力旺盛；