[发明专利]一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液及其制备方法

说明书

本发明提供一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液及其制备方法，该冷冻保护液主要DMSO、十二烷基氨基丙酸钠、卡波姆微球和卵磷脂按照一定重量份的组成，该冷冻保护液在DMSO内加入十二烷基氨基丙酸钠、卡波姆微球和卵磷脂的混合物制成的冷冻保护液可显著提高该冷冻保护液对人胎盘羊膜和绒毛膜冻存的时间，长期保存细胞的活力。

技术领域

本发明属于干细胞冻存技术领域，特别涉及一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液及其制备方法。

背景技术

羊膜和绒毛膜是人胎盘的两个主要组成部分。羊膜在胎盘的最内层，其具有一定的弹性，并具有多潜能性、移植后不会诱导免疫排斥反的多能干细胞，其可分泌神经营养因子，还可作为眼科手术的基底膜；而绒毛膜上同样含有丰富的具有多分化潜能的干细胞，可应用于由于衰老和病变引起的组织器官损伤修复以及移植中。

虽然羊膜和绒毛膜具有很广的应用范围，但是其深低温的保存成了应用的瓶颈。现有技术中用于保存羊膜和绒毛膜的保存液有由胎牛血清、二甲基亚砜和右旋糖酐40组成的冷冻保护液，该保护液保持细胞活力的时间比较短，无法满足临床长时间保存的需要，并不且该保护液中所使用的胎牛血清价格昂贵，并且不同厂家不同生产批次和质量存在显著不同，进而会对整个冷冻保护液的质量产生显著影响，进而影响冻存的细胞复苏率。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液及其制备方法，该冷冻保护液可以长期保存人胎盘羊膜和绒毛膜，并且可长期保存细胞活力。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液，该冷冻保护液主要由下列重量份数的组分组成：

进一步的改进，所述卡波姆微球是由如下重量份数成分制备而成：

磷脂酰丝氨酸 2.5-4.3

卡波姆 0.5-0.8。

本发明提供的人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液，在DMSO内加入十二烷基氨基丙酸钠、卡波姆微球和卵磷脂的混合物制成的冷冻保护液可显著提高该冷冻保护液对人胎盘羊膜和绒毛膜冻存的时间，长期保存细胞的活力。

进一步的改进，所述卡波姆微球是通过如下方法制备得到的：将3/4重量份的卡波姆溶于2重量份的水中，制得卡波姆水溶液；将1/4重量份的卡波姆和磷脂酰丝氨酸加入液体石蜡中混合均匀形成油相，将卡波姆水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，静置分层，去除液体石蜡，洗涤，干燥，即得卡波姆微球。

进一步的改进，所述冷冻保护液中还包括重量份数为0.2-0.5份的月桂酰乙二醇胺和1-2.5份的甘氨酸钠。

本发明通过在冷冻保护液内加入月桂酰乙二醇胺和甘氨酸钠的混合物可以进一步提高冷冻保护液对人胎盘羊膜和绒毛膜的保存时间，提高细胞复苏后的活率，并且还可以提高冷冻保护液的稳定性。

进一步的改进，所述冷冻保护液主要由下列重量份数的组分组成：

本发明另一方面提供一种人胎盘羊膜和绒毛膜的冷冻保护液的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1：卡波姆微球的制备：

将3/4重量份的卡波姆溶于2重量份的水中，制得卡波姆水溶液；将1/4重量份的卡波姆和磷脂酰丝氨酸加入液体石蜡中混合均匀形成油相，将卡波姆水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，静置分层，去除液体石蜡，洗涤，干燥，即得卡波姆微球；