[发明专利]一种在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法

说明书

本发明公开了一种在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法。该方法包括：将待测植物的器官或组织置于交联液中，所述交联液中含有能够与靶标激素交联从而形成半抗原的物质；将处理过的所述待测植物的器官或组织置于渗透液中，增加渗透性；处理过的所述待测植物的器官或组织进行一抗、二抗孵育，然后显色，从而实现在所述待测植物的器官或组织中对所述靶标激素的整体定位检测。本发明所提供的方法无需制备切片，可以在植物器官和组织中对激素进行整体原位检测。本发明方法更加快速便捷，对研究植物体内激素的分布和变化，具有特别重要的意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法及应用。

背景技术

植物激素生长素(Auxin)在植物发育中起着至关重要的作用，是调控植物胚胎发育和胚后发育的关键影响因子，调节包括雌配子体图式形成、胚胎发育、器官发生、分生组织活动，以及对环境刺激和其他的生长反应等许多的过程。生长素作用的一个关键方面是它依赖于局部生长素生物合成和定向、细胞间的生长素运输呈梯度分布(生长素梯度)。这一极性运输在大部分生长素调控的过程中起至关重要的作用，生长素在不同细胞和组织间极性运输，由此产生的生长素峰值和梯度对植物器官发生和形态建成起着决定性作用。不仅如此，生长素在诱导分生细胞产生、维持细胞干性方面也发挥重要作用：在茎端分生组织(SAM)发育过程中，干细胞的维持机制则是由生长素与细胞分裂素的平衡来共同完成的(Moubayidin et al.,2009；Zhao et al.,2010)，生长素浓度梯度分布模式决定了叶原基的发生位置和叶序的形成(Fleming,2005；Heisler et al., 2005)。在根的发育过程中，生长素能够通过诱导中柱鞘细胞成为奠基细胞从而对侧根的发生位置起决定作用(Dubrovsky et al.,2008)，生长素通过极性运输在根端分生组织(RAM)中积累维持干细胞的活性(Terpstra and Heidstra,2009)。生长素还参与到维管束发育、蔽荫反应、向性反应、生物与非生物胁迫的过程(Santner and Estelle, 2009)。此外，生长素还可以调控细胞的分裂与伸长：已知生长素可以调控细胞周期蛋白CDKA/CYCD复合体的形成从而参与细胞G1/S期的转换；同时生长素还可以调节细胞壁的松弛程度导致细胞膨大，引起细胞的伸长(Perrot-Rechenmann,2010)。所有侧生器官的发生都是生长素浓度梯度和转录因子表达区域相互作用的结果(Benkova et al.,2003；Fleming,2005)。之所以生长素在植物生长发育中的呈现出如此重要和复杂的作用，除了与生长素需要以形成特定的浓度梯度发挥作用以外，生长素时空特异性的原位合成和稳态调节以及快速而有效地信号响应机制也是保证其精细调控不同发育事件的重要因素。因此生长素在植物组织或器官中的分布是大家关心的热点之一。

植物激素作用的组织定位，成为深入研究激素调控机理的瓶颈，其挑战主要来自于激素类小分子物质在植物体内的流动性强，原位固定难。激素影响植物发育已是不争的事实，但激素如何影响及其调控的部位和机理人们并不清楚，主要原因是人们不能有效地确定激素作用的具体部位。要确定激素作用的靶位置，必须对激素进行原位的定量和定位。激素的定量测定在技术上已经比较成功，但激素的定位，特别是整体水平的定位，目前尚无成熟的技术。因此要深入研究激素调控植物发育的机理，建立一套有效的激素原位定位技术，并利用该技术来研究激素的分布和变化，具有特别重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法。

本发明所提供的在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法，不包括将待测植物的器官或组织制成切片的步骤；所述方法可包括如下步骤：

(a)将所述待测植物的器官或组织置于交联液中进行处理，所述交联液中含有能够与靶标激素交联从而形成半抗原的物质；

(b)将经步骤(a)处理过的所述待测植物的器官或组织置于渗透液中进行处理，增加渗透性；