[发明专利]一种乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR引物及试剂盒与应用

说明书

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR引物及试剂盒与应用。所述的乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR引物包含雌激素受体α66基因引物、孕激素受体基因引物、人类表皮生长因子受体2基因引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～6所示。本发明还提供了一种乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR快速检测试剂盒，该试剂盒包含上述引物、2×RT‑PCR Buffer、25×RT‑PCR Enzyme、阳性对照和阴性对照等。该试剂盒具有特异性强，灵敏度高、准确性高等特点。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种乳腺癌分子分型实时荧光多重PCR引物及试剂盒与应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤的7～10％，在妇女仅次于子宫癌，它的发病常与遗传有关，以及40～60 岁之间，绝经期前后的妇女发病率较高，是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。

乳腺癌是一种高度异质性的肿瘤，传统的病理形态学分型在目前的临床实践中已逐渐显示出其不完善性。随着人类分子生物学技术的应用，以肿瘤形态学结合基因表达特征的分子分型概念已被学者们所认同。乳腺癌各分子亚型基因表型及临床病理学特点如下：

(1)Luminal A型：是乳腺癌最常见的分子亚型，发病率为44.5～69.0％。雌激素受体(ER或ERR或者ESR)和/或孕激素受体(PR或者PGR)阳性，原癌基因人类表皮生长因子受体2(Her2或者Erb-B2Receptor Tyrosine Kinase 2) 阴性，预后最好。内分泌治疗效果最佳。常采用内分泌治疗。绝经前常选择三苯氧胺，绝经后常选择芳香化酶抑制剂如阿那曲唑、来曲唑等。

(2)Luminal B型：luminal B型为7.8％，雌激素受体(ER)和/或孕激素受体(PR)阳性，原癌基因人类表皮生长因子受体2(Her2)阳性，内分泌治疗仍有效，预后较好。LuminalB型乳腺癌由于HER2表达阳性，对他莫昔芬的反应性低于luminal A型，但改用其他作用机制的内分泌治疗仍有效。治疗常采用化疗+内分泌治疗+靶向治疗。

(3)Her2过表达型：发病率为14.7％，雌激素受体(ER)和/或孕激素受体(PR)阴性，原癌基因人类表皮生长因子受体2(Her2)阳性，化疗效果较好，并且是HER2靶向治疗药赫塞汀治疗的适应病例，HER2(+)型乳腺癌对于环磷酰胺联合蒽环类(AC)化疗方案的疗效明显优于luminal型，前者的临床缓解率可达70％，而后者为47％。

(4)Basal-like型：发病率为17.1％，雌激素受体(ER)和/或孕激素受体 (PR)阴性，原癌基因人类表皮生长因子受体2(Her2)阴性，内分泌无效，化疗效果好，预后最差。其转移多发生于内脏及中枢神经系统。治疗选择化疗。在接受术前新辅助化疗(AC)的乳腺癌患者中，具有较高的总反应率及病理缓解率，85％的患者出现临床缓解，其中27％达到病理完全缓解，明显高于luminal 型乳腺癌。

病理形态相同的乳腺癌，由于分子遗传学改变，在分子水平上呈现高度异质，从而导致肿瘤的预后及对治疗的反应差别很大。而以基因表达谱为基础提出的乳腺癌基因分型，能更精确的反应肿瘤的生物学行为，判断预后，并有利于选择和研究更具针对性的个性化治疗方法。应根据每一位患者的分子分型及其他相关因素，制定个体化、系统性的治疗方案。目前临床上乳腺癌分子分型主要是雌激素受体α66(ER-α66)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(Her2)，检测主要三种方法：免疫组织化学法、逆转录-聚合酶链反应

(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法。免疫组织化学法(IHC)目前是判定乳腺癌分型的重要手段，但是其耗时长、对实验操作要求高，而且结果的判定人为主观性比较强。蛋白免疫印迹法则敏感度偏低。