[发明专利]一种免疫层析试纸条及免疫层析检测方法

权利要求书

1.一种免疫层析检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

主校准曲线的绘制：将待检测物的标准品配制成梯度浓度的标准品溶液，利用免疫层析试纸条对标准品溶液进行检测，所述免疫层析试纸条包括依次相连接的样品垫、标记垫、基膜和吸水垫；所述基膜上依次设置校准线C1线、校准线C2线和测试T线，所述C1线和C2线上分别包被浓度不同的校准物；所述标记垫上含有荧光标记的第一单克隆抗体；所述T线上包被有多克隆抗体；所述校准物为能够捕获所述第一单克隆抗体的物质；收集免疫层析试纸上T线、C1线和C2线处的荧光曲线峰积分面积值，以T线的荧光曲线峰积分面积值作为纵坐标y，以标准品溶液的浓度值做为横坐标x，绘制主校准曲线并获得主校准方程y＝f₁(x)；

校正方程：将C1线上包被的校准物的浓度X_C1代入所述主校准方程得到y_C1，将C2线上包被的校准物的浓度X_C2代入所述主校准曲线得到y_C2；

分别收集C1线和C2线的荧光曲线峰积分面积值Y_C1和Y_C2，利用Y_C1和Y_C2与上述的y_C1和y_C2建立校正方程：

Y＝f₂(x)＝(Y_C2-Y_C1)×y/(y_C2-y_C1)+(Y_C2×y_C1-Y_C1×y_C2)/(y_C1-y_C2)；

其中，Y为检测样本时T线的荧光曲线峰积分面积值，

样品的检测：利用所述免疫层析试纸条对待测样品进行检测，收集免疫层析试纸上T线、C1线和C2线处的荧光曲线峰积分面积值，将T线的荧光曲线峰积分面积值代入所述主校准方程获得待测样品中的待测物的未校正检测浓度；

将所述未校正检测浓度、C1线处的荧光曲线峰积分面积值、C2线处的荧光曲线峰积分面积值带入所述校正方程，获得待测样本中待测物的校正浓度。

2.根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其中，C1线上包被的校准物是由浓度为10-40ng/mL的校准物溶液1以0.2-4μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C1线上干燥后得到的，所述C2线上包被的校准物是由浓度为50-100ng/mL的校准物溶液2以0.2-4μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C2线上干燥后得到的。

3.根据权利要求1或2所述的免疫层析检测方法，其中，所述校准物为第一单克隆抗体的抗原或抗体。

4.根据权利要求3所述的免疫层析检测方法，其中，所述荧光标记的第一单克隆抗体是按照以下方法制备的：

将抗体与荧光微球按照1-4：300的质量比在pH为8.0-8.5的反应缓冲液中结合反应20-40min获得荧光标记的第一单克隆抗体；

其中，所述荧光微球表面具有羟基官能团；

所述反应缓冲液是含有BSA和带氨基基团的烷基硅氧烷的硼酸盐缓冲液，所述反应缓冲液中，所述BSA的质量体积比浓度为9-11％，所述带氨基基团的烷基硅氧烷的质量体积比浓度为0.8-1.2％。

5.根据权利要求4所述的免疫层析检测方法，其中，所述带氨基基团的烷基硅氧烷为(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷、(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷和(3-氨基丙基)二甲基甲氧硅烷中的至少一种；

所述荧光微球为聚苯乙烯包埋镧系元素微球、聚乙烯包埋量子点微球或聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球。

6.根据权利要求4所述的免疫层析检测方法，其中，在所述反应缓冲液中，抗体的用量按质量体积比计为1.5-2％。

7.根据权利要求1、2和6中任意一项所述的免疫层析检测方法，其中，所述T线上包被的多克隆抗体是由浓度为0.2-2mg/mL的多克隆抗体溶液以0.2-4μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在T线上干燥后得到的。