[发明专利]用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法在审
| 申请号： | 201711251509.3 | 申请日： | 2017-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN109870525A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 蒋贤龙 | 申请（专利权）人： | 蒋贤龙 |
| 主分类号： | G01N30/06 | 分类号： | G01N30/06;G01N30/34 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 221700 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 液相色谱法 分离测定 流动相 多肽 乙腈 杂肽 磷酸盐溶液 浓度梯度洗脱 烷基键合硅胶 多肽溶液 分离分析 三氟乙酸 固定相 色谱柱 原料药 检测 分析 | ||
1.一种用液相色谱法多肽中杂肽的方法，其特征在于：液相色谱法所用的色谱柱中，固定相为烷基键合硅胶，流动相为乙腈-磷酸盐溶液，其中，以磷酸盐溶液或含有适量乙腈的磷酸盐溶液为流动相A，磷酸盐溶液的浓度为0.01～0.1mol/L；以乙腈或含有适量磷酸盐溶液的乙腈为流动相B，采用乙腈进行梯度洗脱，且按体积比计流动相B占整个流动相的浓度梯度范围为10～90%；所述的多肽溶液的浓度为1ml溶液/0.1～5mg多肽。
2.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的固定相烷基键合硅胶为十八烷基键合硅胶、十二烷基键合硅胶、辛烷键合硅胶中的一种。
3.根据权利要求2所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的烷基键合硅胶为末端封尾的十八烷基键合硅胶。
4.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相A中，磷酸盐溶液为磷酸钾盐溶液、磷酸钠盐溶液、磷酸铵盐溶液中的一种。
5.根据权利要求4所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的磷酸盐溶液为磷酸二氢钾溶液，以磷酸二氢钾用水配制配成0.05mol/L，用8～12%氢氧化钠溶液调节pH值为4.8～5.2。
6.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相B的浓度梯度范围为25～60%。
7.根据权利要求6所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相B的浓度梯度为：0min时为25%，50min时为50%，70min时为60%。
8.根据权利要求1所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述流动相的流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200～230nm，色谱柱柱温为20～60℃，取多肽溶液2～100μl注入高效液相色谱仪，进行多肽及其中杂肽的分离和测定。
9.根据权利要求8所述的用液相色谱法分离测定多肽及其中杂肽的方法，其特征在于：所述的流动相的速度为1ml/min，检测波长为215nm，色谱柱柱温为40℃。
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